1、原理
试样进行抽提和稀释，加人内标物，用高效液相色谱仪分离，再用紫外检测器测定香兰素的含量。
2、试剂
分析纯试剂、蒸馏水、去离子水或相等纯度的水。
乙醇：95% (体积分数)。
甲醇：色谱纯
磷酸溶液: 0.01 mol/L,
流动相:用25份甲醇与75份稀磷酸混合。用膜过滤、脱气。
香兰素(4-经基一3一甲氧基苯甲醛)对照标样：纯度大于99% .
内标物:乙酞水杨酸，纯度大于99% 。
3、香兰素储备液:
称取一定量的香兰素,精确至0.001g。用流动相配制成为浓度为1g/L的标准储备液。
4、工作溶液
用流动相稀释储备液，获得工作溶液。香兰素工作溶液浓度为0.1gL，可在4℃下暗处保存不超过10 天。
5、内标物溶液
将乙酞水杨酸溶解于流动相中，使其浓度为0.6 g/L，称量时精确至0.001 g。
注: 内标浓度应与样品溶液中香兰素浓度基本一致.
6、仪器
气密研磨器。
单标容量瓶，容量为100 mL 和200 mL。
过滤膜，孔径为0.45um 。
连续型索氏抽提仪，由下列部件组成。
连续型索氏抽提仪：125 mL 索氏抽提器。
冷凝器。
250 mL 磨口烧瓶。
热源:带有滑动变阻器或其他控热方式的电热套或油浴。
高效液相色谱仪:配紫外检测器;
色谱柱:C18，硅胶柱，5um - 10um 粒径。
注射器:用于高效液相色谱仪。
分析天平：精确度为0.001 g.
7、试样的制备
将样品(香草兰豆荚、切段或香草兰粉)研磨并使之充分混匀。称20g已制备好的样品，准确至0. 001g,在抽提仪器中用大约200 mL 乙醇抽提试样16h，即溶剂进行25次~ 30 次循环。
每100g 豆荚用1L溶剂抽提。将抽提物转移至一个 200mL的容量瓶中。用少量的乙醇清洗抽提仪器中的烧瓶数次，并将洗出液加人容量瓶中，乙醇定容并混合均匀。用流动相稀释该溶液 10 倍。
8、分析步骤
流动相流速大约为 1 mL/min，室温进行分析。
用 10 mL 内标物与10 mL 根据制备的样品溶液混合。用膜过滤。待测定的物质的质量用式(2)计算:
( 2 )
注: 式中的峰高可由其峰面积代替