馬伊琍1976年生於上海，1991年，當時年齡只有15歲的馬伊琍，只是剛剛參加東方衛視的綜藝舞蹈隊，半工半讀，勤工儉學開始自食其力賺取學費。
1993年，馬伊琍參與電影《劉海慄》的拍攝，並就此涉足娛樂圈並踏上演藝之路。當時參演這部電影的時候，馬伊琍僅僅17歲，但是在電影之後，她就收到800元的片酬，對於剛剛開始的90年代來說，實屬一筆鉅款了。
在參演了電影《劉海慄》之後，激發了她對於表演的濃厚興趣，於次年，也就是1994年，順利考入上海戲劇學院，成為94屆表演系本科生。
從大三開始直到畢業，馬伊琍都一直活躍於當時的影視圈，曾多次出演多部電影及電視劇。並於2001年憑藉電影《西施眼》的精彩表現，獲得2002年夏威夷國際電影節最佳電影獎。
被公眾熟悉是在2002年馬伊琍出演的《還珠格格》第三部，在劇中飾演夏紫薇的角色。
與現任丈夫的首次合作是在2005年兩人共同出演的電視劇《錦衣衛》，在劇中馬伊琍出演一位端莊大氣，有著傾國容貌的客應月。估計當時與文章的合作，也擦出了愛情的火花。
2006年，馬伊琍演技已逐漸成熟，隨後在與陳建斌、蔣勤勤合作的電視劇《喬家大院》時，劇中飾演江雪瑛的精彩演繹，使其人氣高漲，該電視劇在當年的持續熱播，也創造了收視紀錄。
隨後，另一部更加精彩的電視劇便是與文章共同主演的《奮鬥》，當時馬伊琍與文章也已經開始交往，並確定戀愛關係。《奮鬥》播出之後，馬伊琍驟然躋身於一線明星陣營。
《奮鬥》之後，馬伊琍與文章大方公開戀情並於2008年登記結婚，當時雙方年齡相差8歲，這樣的姐弟戀，也面對很多媒體的質疑與八卦。
不過，結婚之後，兩人的愛情生活在外人看來一直很幸福美滿，再有文章多以正派好男人形象參演多部影視劇，夫妻雙方几乎成為娛樂圈典型的夫妻楷模。
然而，事實並非如此，2014年文章出軌姚笛事件，迅速引爆娛樂圈。網友紛紛感到惋惜的同時，極力譴責文章，並心痛同情馬伊琍。還記得當年的流行語嗎：戀愛雖意，婚姻不易，且行且珍惜！
不過，據傳馬伊琍在與文章相識之前，曾與導演管虎有過一段長達5年的戀愛長跑，而管虎正好比馬伊琍大8歲，最終兩人和平分手。也有媒體爆料，兩人的分手，是因為管虎的現任妻子梁靜作為第三者插足才致使這段感情結束。
後來，馬伊琍表示，管虎是很有才華的導演，平時生活倒像個大孩子，工作很出色，生活卻很欠缺，事事需要照顧，雙方在一起並不合適，但是馬伊琍否認雙方分手是因為梁靜插足導致的兩人分手。
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