作者丨唐一塵
2020年3月4日，美國疾控中心等機構的研究人員在bioRxiv上發表論文，描述了從第一個美國新冠肺炎患者體內分離出的病毒，並描述了其基因組序列和複製特性。
研究人員表示，此次疫情傳播速度之快前所未有，迫切需要為進一步研究新冠病毒提供參考試劑。
公共衛生界也需要病毒裂解物作為診斷參考，而研究界需要病毒分離物測試抗病毒化合物、開發新疫苗和進行基礎研究。
（注意：預印本網站bioRxiv所有論文未經同行評議）
自新冠肺炎疫情暴發以來，美國第一例患者於1月20日被華盛頓州和美國疾控中心確診。
研究人員從該患者鼻咽（NP）和口咽（OP）標本中分離出病毒，並對病毒序列、複製特性和細胞培養向性進行了表徵。
研究人員於1月22日將陽性標本重新制作和冷凍，然後接種到細胞培養皿中。
2天后，研究人員觀察到細胞病變效應（CPE），並在3天后收集到病毒裂解液。
50µl首次提取的病毒裂解物被用於新冠病毒核酸測試，能檢測新冠病毒的離析。
研究人員還用檢測了提取物中是否存在另外33種不同的呼吸道病毒和細菌病原體，未發現其他病原體。
此外，薄切片電子顯微鏡也支持鑑定。研究人員還觀察了冠狀病毒的形態和形態發生特徵。
接種後3天vero單分子層圖像
研究人員測序了從第一代OP和NP標本中分離出的病毒，結果顯示完全匹配。
並且，研究人員在沒有胰蛋白酶的情況下傳代了這種病毒。
而且，在缺乏胰蛋白酶的情況下，新冠病毒在VeroCCL81細胞和Vero E6細胞中複製到高滴度。
研究人員在VeroE6細胞（另一種恆河猴胎兒腎臟細胞系）上產生了第四代新冠病毒。
RNA測序顯示，其與原始序列相比無核苷酸突變。
SARS-CoV和MERS-CoV也分別在VeroE6和VeroCCL81細胞上生長良好。
經過一系列的稀釋感染後，研究人員還發現新冠病毒在兩種Vero細胞中都有複製，然而，VeroE6細胞的病毒滴度略高於Vero CCL81。
此外，斑塊在Vero E6上更加清晰可見（如圖）。
早在接種後2天，VeroE6細胞就產生了明顯的斑塊，並可見中性紅染色。
相比之下，Vero CCL81產生的斑塊較少。
研究人員已將病毒分離物存入兩個病毒試劑庫，BEI資源和世界新興病毒和蟲媒病毒參考中心，以便公眾衛生和研究界能夠廣泛獲得該病毒及相關信息。
相關論文信息：
https://doi.org/10.1101/2020.03.02.972935
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