快速分离水中肠球菌的方法

肠球菌属(Enterococcus),为革兰阳性,成双或短链状排列的卵圆形球菌,无芽胞,无荚膜,部分肠球菌有稀疏鞭毛。肠球菌最初列为D群链球菌,1984年,肠球菌被重新分类为肠球菌属,在经过DNA-DNA和DNA-RNA杂交的研究后证明它与链球菌属有较远的关系。


肠球菌是人类和动物肠道正常菌群的一部分,通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现,既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌,但近年研究已证实了肠球菌的致病力。在需氧革兰阳性球菌中,它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌,肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染,还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。


肠球菌通常从食品、植物、水和土壤中分离,可能由于它的来源是粪便使得他们的天性在恶劣环境中比较耐受。在牛奶和奶酪制品中通常会找到粪肠球菌、屎肠球菌和少量的坚忍肠球菌,偶然也会发现小肠肠球菌和铅黄肠球菌。不同于其他乳酸菌,肠球菌不能被认为是“一般认为安全”(GRAS),并且它在水中检测是作为粪便污染物的指标的。一般认为对于肠球菌的安全评价程序是一个模棱两可的状况。一方面,肠球菌在作为奶酪技术中作为发酵培养物被认为是由积极作用的;另一方面,它们被认为是新兴的人类病原体。


由于肠球菌的表型多样性,这使得肠球菌种的生理测试鉴定一直存在问题。此外,物种鉴定的常规实验往往需要很长的培养时间。使用16S和23S rDNA基因的基因型鉴定方法更加的准确,但是它们还不能区分所有肠球菌的物种(例如鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌有99.8%的16S rDNA的同源性)。


国标中分离和鉴定肠球菌应用倾注法,根据样液在选择性肠球菌琼脂(36 ℃±2 ℃培养18 h~24 h)或KF琼脂(36 ℃±2 ℃ 培养24 h~ 48h)上生长的典型菌落数,在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落;在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落,边缘整齐, 用无菌接种针从每个肠球菌琼脂平板或KF平板挑取5个典型菌落,进一步做确证实验。


HiMedia公司(国际知名微生物培养基生产商)生产的快速肠球菌显色培养基(货号:M1414),该培养基中的蛋白胨为菌种提供氮源,添加的氯化钠使肠球菌的快速生长保持渗透平衡,叠氮化钠能抑制伴随的微生物菌落,尤其是革兰氏阴性菌,存在于肠球菌中的酶β-D-葡糖苷酶裂解显色底物,使菌落呈蓝绿色。HiMedia的快速肠球菌显色培养基用于快速鉴定和区分水样中的肠球菌,18-24h后出结果,方便快捷。我国在新修订的生活饮用水卫生标准GB5749-2006中资料性附件中增加了肠球菌和产气荚膜梭状芽胞杆菌,修订后限值肠球菌/(CFU/100mL) 和产气荚膜梭状芽胞杆/(CFU/100mL)限值均为0,快速肠球菌显色培养基的研发,为快速检测水中肠杆菌起到重要意义。


快速分离水中肠球菌的方法


快速肠球菌显色培养基(货号:M1414)在国际上得到了广泛的应用,如Chellandi Mohandass等人,在研究喀彻湾沿岸的沿海地区,潮汐周期中水质指标的分散性和可收回性文章中就有应用(Chellandi Mohandass, S. Jaya KumarN, Ramaiah.Dispersion and retrievability of water quality indicators during tidal cycles in coastal Salaya, Gulf of Kachchh.Environmental Monitoring and Assessment[J], 2010, 169(10): 639–645);Krishna M. Raja等人,推定致病性标记香港海鸥形菌的ESBL基因和脂多糖的分子生物学研究中也有应用(Krishna M. Raja ,Asit Ranjan Ghosh.Molecular Insight of Putative Pathogenicity Markers with ESBL Genes and Lipopolysaccharide in Laribacter hongkongensis.Applied Biochemistry and Biotechnology[J], 2014, 174(5) : 1935–1944.)


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