在這次抗擊新冠肺炎疫情中，有定點診療醫院採用中醫藥救治患者，並取得了明顯療效，中醫藥可謂“大放異彩”，為中國傳統醫術進行了“正名”。今天就為做中醫藥分析的小夥伴梳理一下中藥製劑檢測的基本程序及方法，也給不瞭解中醫藥分析的小夥伴做一個簡單的小科普。
中藥試劑檢測對象包括製劑生產中的半成品、成品及新藥開發研究中的試驗樣品，其檢驗程序一般可分為取樣、供試品溶液的製備、鑑別、檢查、含量測定、己錄及出檢驗報告。
1取樣
分析樣品首先是取樣，取樣必須具有科學性、真實性和代表性。因此．取樣的基本原則應是均勻合理，所取樣品有代表性。取得的樣品要妥善保管，同時註明品名、批號、數量、取樣日期及取樣人等。兇中藥製劑的組成一般都分佈均勻，在藥品質量標準中對每種藥品的具體取樣方法都有規定，當遇到樣品量大或包裝為箱時，可用以下方法取樣。
1、固體樣品的取樣方法
(1)抽取樣品法當藥品包裝為箱或袋，且數量較大時，可隨機從大批樣晶中取出部分箱或袋，再從留取的箱或袋中用專用的取樣工具從各個部位取出一定樣品，以備檢驗。
(2)圓錐四分法，這種採樣方法適用於樣品量不大的粉末狀、小塊狀以及小顆粒狀樣品的取樣。
其操作方法為：用適當的器皿將樣品堆積成正圓錐形狀後，再將正圓錐的上部壓平，然後從圓錐上部被壓平的平面上十字狀垂直向下切開，將其分成均等的四份，取出對角的兩等份，並將兩份混合均勻。如此重複操作，直至最後取得的樣品量適於檢驗的需要。
有些固體樣品需要粉碎，粉碎後按要求過篩，使其全部通過篩孔，再進行取樣。各類中藥製劑取樣量應至少為3倍檢測的用量，貴重藥町酌情取樣。按《中國藥典》規定，每份檢測取樣散劑、顆粒劑應不少於10袋；片劑不少於20片；丸劑不少於10丸(袋、瓶)；膠囊劑不少於20粒；滴丸不少於20丸；膏藥不少於5張；茶劑不少於10塊(袋、包)；栓劑不少於10粒。
2、液體樣品的取樣方法
液體樣品各組分的分散均勻性比固體樣品好，一般容易得到均勻的樣品，檢驗誤差也比固體小。但混濁液和濃度大的溶液(如糖漿劑等)均勻性較差，對這類樣品採樣時，可用吸管從容器中分層取樣，然後將取出的樣品混勻。當樣品有沉澱時，要搖勻後再取樣。
供試樣品檢查完畢，應保留一半數量作為留樣觀察，保存時間為半年或一年，並對該中藥製劑質量情況作定期檢查。
2供試品溶液的製備
中藥製劑的組成比較複雜，干擾成分較多，一般在測定前要經過提取和純化處理。
1、提取方法
(1)萃取法萃取法
萃取法萃取法是利用溶質在互不相溶的溶劑中溶解度不同，經過多次萃取，將測定組分提取出來的方法。萃取用溶劑的選擇是根據相似相溶的原理，極性較強的有機溶劑正丁醇等多用於皂苷類成分的提取；醋酸乙酯多用於提取黃酮類成分；氯仿分子中的氫與生物鹼形成氫鍵．可用於生物鹼的提取；揮發油等非極性組分用非極性溶劑乙醚、石油醚等提取。對於弱酸、弱鹼性成分的提取，應注意萃取時的pH值調整，酸性組分提取的pH值一般比其pKa低1～2個pH單位；鹼性成分提取的pH值一一般比其pKa高1～2個pH單位。在萃取過程中應注意防止和消除乳化現象。萃取的完全程度可用回收率考察。
主要萃取方法有：①單一溶劑萃取法；②分段萃取法；③液液萃取法；④固液萃取法。
(2)冷浸法冷浸法
是將溶劑加入樣品粉末中。在室溫下放置一定時間，組分隨擴散從樣品粉末中浸出的提取方法。冷浸法操作簡便，適用於固體制劑中遇熱不穩定組分的提取。例如，《中國藥典》一部收載的品種八味沉香散，其中用於木香薄層鑑別的供試品溶液的製備採用了該方法。
具體方法：取樣品4g，加乙醚20mL，搖勻，密封，放置24h，過濾，濾液濃縮至約2mL，作為供測試溶液。
(3)迴流提取法
迴流提取法是將樣品粉末置於燒瓶中，加一定有機溶劑，水浴加熱使其微沸，進行迴流提取。該法適用於固體制劑的提取。提取前應將樣品粉碎成細粉，以利於組分的提取。在進行定量分析時，可多次更換溶劑提取，至組分提取完全，合併提取液供分析用。對熱不穩定或有揮發性組分則不宜採用迴流提取法。例如，《中國藥典》一部收載的品種華佗冉造丸，其中用於冰片薄層鑑別的供試品溶液的製備採用了該方法。
具體方法：取樣品8g，研碎，加乙醚50mL，加熱迴流1h，過濾，濾液揮幹，殘渣加醋酸乙酯2mL使溶解，作為供試品溶液。
(4)連續迴流提取法
連續迴流提取法是使用索氏提取器連續提取的方法。該法應選用低沸點的溶劑，如乙醚、甲醇等。例如，《中國藥典》一部收載的品種防風通聖丸，其中用於大黃薄層鑑別的供試品溶液的製備、麻仁潤腸丸含量測定用供試品溶液的製備均採用了該方法。
具體方法：取防風通聖丸樣品15g，研細，置於索氏提取器中，加稀硫酸10mL潤溼，再加三氯甲烷40mL，加熱迴流8h，分取三氯甲烷液，蒸乾，殘渣加0.1mol／L氫氧化鈉溶液使呈鹼性，攪拌使溶解，過濾，濾液加稀鹽酸調節pH值至2～3，再用三氯甲烷適量提取，提取液濃縮至2mL，作為供試品溶液。
(5)水蒸氣蒸餾法
水蒸氣蒸餾法適用於可隨水蒸氣蒸出的揮發油、對熱穩定的小分子生物鹼組分的提取。《中國藥典》一部收載的品種滿山紅油膠丸的含量測定採用了該方法。
具體方法：取樣品40丸，精密稱定，置於燒瓶中，加水適量(300～500mL)與玻璃珠數粒，振搖混合後，連接揮發油測定器與迴流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發油測定器的刻度部分，並溢流入燒瓶時為止。將燒瓶置於電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸，並保持微沸約5h，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達刻度0線上面5cm處為止。放置1h，開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發油量，計算樣品中揮發油的含量(％)。
(6)超聲提取法
超聲波有助溶的作用，可用於樣品中測定組分的提取。由於超聲提取過程中溶劑可能會有一定的損失，因此用於定量測定時，應於超聲前先稱定質量，提取完畢後，放至室溫，補足減失的質量，濾過，取續濾液備用。該法的特點是提取時問短，適用於固體制劑測定組分的提取。《中國藥典》一部收載的品種安神膠囊，其中用於五味子薄層鑑別的供試品溶液的製備採用丁該方法。
具體方法：取樣品20粒內容物，研細，加三氯甲烷30mL，超聲處理30mLn。過濾，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷1mL，使溶解，作為供試品溶液。
(7)超臨界流體萃取法
超臨界流體是指壓力和溫度超過物質的臨界點時，所形成的單一相態。超臨界流體既具有與液體相似的密度，又具有與氣體相似的擴散係數。該法提取效果好、提取時間短，通過改變萃取的溫度、壓力等，可以選擇性地萃取某些組分。最常使用的超臨界流體是超臨界CO2和趟臨界N2O。以上各種提取方法可以單獨使用，但由於中藥製劑成分複雜，很多藥物多種方法並用。
2、淨化方法
提取液大多還需作進一步的淨化分離，除去幹擾組分後才可進行測定。淨化的原則是從提取液中除去對測定有干擾的雜質，而又不損失被測定成分。淨化分離方法的設計主要依據被測定成分和雜質在理化性質上的差異，同時結合與所要採用的測定方法的要求綜合考慮。
常用的淨化方法有以下幾種：①液一液萃取法；②色譜法；③沉澱法；④鹽析法。
此外還有液相微萃取、濁點萃取等新技術，也可用於中藥質量檢驗的樣品純化。也可用蒸餾法淨化，收集餾出液進行分析，或某些成分經蒸餾分解生成揮發性成分，利用分解產物進行測定。
3鑑別
中藥製劑的鑑別試驗目的在於確認其所含藥味的存在。對於無含量測定項目的中藥製劑，鑑別是控制其質量的關鍵。中藥複方製劑一般不要求鑑別所有藥味，應首選君藥與臣藥進行鑑別。常用的鑑別方法有顯徽鑑別、理化鑑別、色譜鑑別和光譜鑑別。
1、顯微鑑別
顯微鑑別是指用顯微鏡對藥材的切片、粉末、解離組織或表面製片及成方製劑中藥味的組織、細胞或內含物等特徵進行鑑別的一種方法。含有原生藥粉的中藥製劑可選用該法鑑別。處方中的主要藥味及化學成分不清楚或無化學鑑別方法的藥味，應做顯做鑑別。鑑別特徵如薄壁細胞、木栓組織、纖維及澱粉粒、花粉粒、碳酸鈣結晶等。顯微鑑別是中藥製劑主要的鑑別方法。
2、理化鑑別
理化鑑別是利用藥材中的特定成分結構、官能團與一定試劑發生化學反應來進行鑑別的方法。鑑別的成分是已知的有效成分、特徵成分及處方中某一味藥所單獨含有的成分。理化鑑別砬選用專屬性強且靈敏的方法。
3、色譜鑑別
色譜法分離效果好、靈敏高，特別適用於中藥製劑的鑑別。
(1)薄層色譜法薄層色譜法是中藥製劑中應用最多的一種鑑別方法。採用本法，應注意以下幾個方面：
①固定相的選擇：薄層鑑別中最常用的是硅膠板。氧化鋁板多用於生物鹼類成分的鑑別．黃酮類和酚類化合物鑑別使用聚酰胺板．氨基酸使用纖維素板。
②點樣：按規定用專用毛細管分別取供試品溶液、對照藥材溶液或對照品溶液適量(薄層鑑別法需用藥材或有效成分對照品作對照。取供試品、對照藥材或有效成分對照品同法制備的溶液，以垂直方向做點狀點樣或條帶狀點樣。
③展開劑的選擇：展開劑多為混合有機溶劑。R，值主要靠加入不同極性的溶劑調節。常用有機溶劑的極性對於正相色譜由小到大為：石油醚
④定位：供試品溶液所顯主斑點應與對照主斑點相對應。特徵斑點應選擇已知有效成分或特徵成分的斑點．如有效成分未知或無法檢出，可選擇未知成分的特徵斑點，但要重現性好，斑點特徵明顯。
(2)氣相色譜法氣相色譜法用於製劑中含揮發性成分藥材的鑑別，如冰片、麝香等。
(3)高效液相色譜法該法很少用於鑑別，若含量測定採用高效液相色譜法可同時用於鑑別。
4、光譜鑑別
常用的有紫外分光光度法和紅外分光光度法。由於光譜法專屬性不如色譜法．使用前應確認排除能產生干擾的組分後方可使用。
4檢查
檢查項目是中藥製劑質量標準中的一項重要內容，按《中國藥典》要求，中藥製劑的檢查項目一般包括製劑通則檢查、一般雜質檢查、特殊雜質檢查及微生物限度檢查。
1、製劑通則檢查
檢查項目的內容與中藥製劑的劑型有關，如丸劑要求測定水分、重量差異、溶散時限及重量差異，片劑要求測定重量差異、溶出度、崩解時限等，酒劑要求測定乙醇量、甲醇量、總國體、裝量等，注射劑要求測定裝量、pH值、可見異物、不溶性微粒、無菌等。
2、一般雜質檢查
一般雜質是指在藥材生長、採集、收購、加工、製劑的生產或貯存過程中容易引入的雜質，如水分、灰分、酸不溶灰分、重金屬、砷鹽、殘留農藥及殘留溶劑等。
3、特殊雜質檢查
特殊雜質檢查是指有針對性地對與質量直接有關的專項檢查項目進行檢查，如大黃流浸膏中土大黃昔的檢查。阿膠中揮發性鹼性物質的檢查。含制附子、制川烏、制草烏製劑中酯型生物鹼的限量檢查等。
4、微生物限度檢查
微生物限度檢查係指對非規定滅菌製劑及其原、輔料受到微生物汙染程度的一種檢查。微生物限度檢查包括染菌量及控制菌的檢查。一般的中藥製劑都應檢查細菌數、黴菌和酵母菌數，其限度隨劑型而異。有砦劑型還規定不得檢出大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。含動物及臟器的製劑(包括提取物)還不得檢出沙門氏菌，用於創傷、潰瘍、止血、深部組織及陰道的含原藥材粉的製劑，還不得檢出破傷風梭菌。中藥製劑若黴變、長蟎者以不合格論。對於有些製劑還要進行指紋圖譜的檢查，測定檢品的指紋圖譜與標準指紋圖譜進行相似度分析．以衡量制劑工藝的穩定性和產品的均一性。
5含量測定
含量測定是控制中藥製劑內在質量的重要方法。測定對象應該是製劑中起主要作用的有效成分或毒性成分，以保證臨床用藥的有效性和安全性。中藥製劑組成複雜，成分眾多，產生療效的往往是多種成分的協同作用，很難用一種成分作為療效指標，儘管如此，選擇具有生理活性的主要化學成分作為含量測定的項目，對控制藥物的質量，保證製劑質量的穩定性，仍然具有重要意義。含量測定的一般步驟如下。
1、藥味的選定
中藥製劑大多為複方，根據中醫理論，每味藥在藥方中所起作用不同。應按照中醫理論的組方原則．選取起主要治療作用的藥物建立含量測定項目，同時也應考慮對貴重藥、毒性藥的質量控制。
2、測定成分的選定
當製劑中被測定藥味確定以後，要確定被測成分，因為每昧藥所含成分眾多．在確定被測成分時，應首選有效成分．因為要真正達到控制中藥質量的目的，必須實行對有效成分的檢控一還要綜合考慮各方面因素，使測定指標既有實際意義，又能達到控制產品質量的目的。此外，在中藥製劑中有含量測定的藥味，原料藥必須要有含量限度，以保徵成品質量。
3、測定方法及條件的選定
町用於中藥製劑分析的測定方法很多，在選用分析方法時，要根據被測成分的性質、含量、干擾成分的性質等因素進行綜合考慮，另外還要考慮方法的靈敏性、準確度及普及性。化學分析法可用於成分清楚、比較純淨的中藥製劑(如總提取物)及含有礦物藥的中藥製劑的含量測定。
色譜法在中藥製劑分析中應用最為廣泛。包括氣相色譜法、高效液相色譜法、薄層掃描法及高效毛細管電泳法等，這些方法都具有分離和分析的雙重功能，特別適用於像中藥製劑這樣混合物的分析，並且都配備有高靈敏度的檢測器。對於微量成分的檢測也很方便。此外，光譜法也可應用，但抗干擾能力不及色譜法。當分析方法選定以後，要根據分析方法的原理、儀器結構特點等選擇合適的測定條件。以保證測定結果的準確性、穩定性和靈敏性。
4、方法學考察內容
在研究制定中藥製劑質量標準時，對於所選定的定量方法要進行方法學考察，以保證測定結果準確可靠。其主要內容包括線性與範圍試驗、穩定性試驗、精密度試驗、重複性試驗、專屬性試驗、定量限、加樣回收率試驗、耐用性試驗等。在這些試驗內容符合定量要求的前提下，才能最終確定分析條件。
6記錄和檢驗報告
1、記錄
中藥製劑質量檢測必須要有完整的原始記錄，記錄要真實、完整、清晰、具體。應用專用記錄本，用鋼筆或特種圓珠筆書寫，一般不得塗改(若有寫錯時，應立即在原數據上劃上單線或雙線，然後在旁邊改正重寫)。記錄內容一般包括供試藥品名稱、來源、批號、數量、規格、取樣方法、外觀性狀、包裝情況、檢驗目的、檢驗方法及依據、收到日期、報告日期、檢驗中觀察到的現象、檢驗數據、檢驗結果、結論等。若進行質量標準研究．對於方法的選擇、樣品的處理、研究結果等都應用圖譜、照片或複印件等形式記錄下來。原始記錄應妥善保存，以備查。
2、檢驗報告
書寫報告時文字要簡潔，內容要完整，報告內容一般包括檢驗項目(定性鑑別、檢查、含量測定等)、標準規定(標準中規定的檢測結果或數據)、檢驗結果(實際檢驗結果或數據)等內容。經檢驗所有項目符合規定者，作符合規定的結論，否則應提出不符合規定的項目及相應結論。
以上是常規的中藥製劑質量檢測的基本程序，此外，中藥製劑質量檢測工作還包括製劑質量標準的制定、中藥製劑的質量評價、中藥製劑質量標準的制定等內容。中藥製劑的質量評價可以參考以上程序，採用現代分析手段，利用化學、生物學等方法。測定多種化學成分或其他信息，進行綜合質量評價，以客觀反映中藥的實際質量。
來源：中國標準物質網
