生物樣品的出現,會對RNA所帶來影響?

一般來講,如果實驗的目的是為了檢測基因組或者染色體上的突變,則往往涉及樣品基因組DNA的製備及純化、PCR、標記等步驟。如果是為了進行基因的表達分析,則通常涉及mRNA的製備及純化、cDNA的合成、體外轉錄或PCR、標記等步驟。

生物樣品的出現,會對RNA所帶來影響?

從血液或活組織中獲取DNA/mRNA樣品時,要注意保持樣品的穩定。尤其對於RNA來說,一旦生物樣品被收集分離,它的RNA會立刻變得非常不穩定,極易被降解。由於特異及非特異的RNA降解,或者由於應激反應產生新的RNA都會引起RNA狀態的改變。因此,採樣後立即穩定樣品裡的RNA以保存當時RNA的表達狀態,是精確/定量研究基因表達分析的重要前提。為了達到這個目的,往往需要採樣後立即抽提RNA,或者將液氮或乾冰帶到採樣現場,將樣品立刻凍存後運回實驗室低溫保存。

生物樣品的出現,會對RNA所帶來影響?

待檢測DNA或RNA在標記以前一般需要進行目的基因片段的擴增以提高靈敏度。一般採用固相PCR系統,即在靶DNA上設計一對雙向引物,將其固化在丙烯酰胺薄膜上,加入模板及PCR試劑,在固相表面進行PCR反應,擴增時所合成的DNA會在引物間形成橋,從而避免了非特異擴增的競爭。

生物樣品的出現,會對RNA所帶來影響?

為了獲得基因的雜交信號必須對目的基因進行標記。標記物有熒光色素、生物素、地高辛、放射性核素等。標記物一般伴隨著體外轉錄、PCR、反轉錄等過程引入到被檢測樣品中。常用的熒光染料有Cy3、Cy5、FITC、fluorescein、Texas red、rhodamine、bodipy、Alexa dye等,如果同時使用雙色或多色熒光標記,則可以在一張芯片上同時檢測2個或多個樣品。


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