在外面之前的科普文章中，已經多次給大家介紹過乙肝病毒的cccDNA。cccDNA是由病毒基因組rcDNA進入細胞核後形成的，作為病毒蛋白及後代
病毒產生的模板存在。由於它模仿細胞基因組形成了微小染色體，在核內長期存在。目前的乙肝抗病毒藥物中的核苷類似物（也就是我們常用的口服抗病毒藥）主要目的是抑制病毒的逆轉錄過程，無法直接針對cccDNA。這就導致了乙肝病毒HBV很難被現今治療方案根除，以至於大部分慢乙肝患者需要持續吃藥。
目前我們對於cccDNA的形成和降解機制仍不清楚，但cccDNA在細胞中的水平很低，先天性免疫可以部分解釋這個原因。實驗表明cccDNA可能會被APOBECs等宿主病毒限制因子通過直接的脫氨基而破壞，或者通過產生過度變異的病毒基因組，從而導致形成的cccDNA無法產生可以存活的乙肝病毒HBV。
今天我們要給大家介紹的這項研究就是關於cccDNA的維持機制的。以往的研究表明，DNA甲基化酶DNMT3A是一把“雙刃劍”：它一方面參與了機體的抗病毒機制，它的上調錶達會甲基化cccDNA從而抑制其轉錄和複製；但是另一方面它也會甲基化宿主的DNA，從而導致損傷的積累，並有可能能推動肝癌的發展。
在這項研究中，研究者將DNMT3A轉染至乙肝病毒HBV表達的細胞系，使用crispr/cas9敲除APOBEC3A和APOBEC3B基因的表達，用qPCR、southern印跡和表面抗原定量來檢測HBV複製及靶基因表達的改變，使用熒光細胞分選分析細胞週期。研究結果顯示，乙肝病毒HBV的複製誘導了DNA甲基化酶DNMT3A的表達，從而導致HBV轉錄本的減少，但是卻提高了cccDNA的增加。因為DNA甲基化酶DNMT3A加速了感染細胞的增殖，而且不能通過阻斷細胞靜止來促進cccDNA池的補充，所以細胞週期與cccDNA水平的升高無關。與此同時，DNA甲基化酶還抑制了APOBEC3A和APOBEC3B這兩個先天免疫因子的轉錄。經crispr/cas9敲除的APOBEC3A和APOBEC3B基因對HBV 轉錄本的影響較小，但顯著使cccDNA的水平升高，這與DNA甲基化酶DNMT3A得到的結果類似。研究者進一步的將DNA甲基化酶過表達結果顯示，DNMT3A通過誘導DDR因子的異常表達來促進基因組的不穩定性，並推測可能通過抑制ATM和ATR細胞水平間接地限制HBV的轉錄。
這項研究通過細胞實驗證明了先天免疫因素DNMT3A的表達是HBV cccDNA形成的限制因素。闡明HBV cccDNA內在形成和降解機制才會為cccDNA提供治療靶標,從而達到臨床治癒。相對於目前不那麼清楚的cccDNA相關機制，我們希望在此項研究之後，醫學界能出現更多進展，從而推動乙肝治癒研究的進一步發展。
參考文獻：Replenishment of Hepatitis B Virus cccDNA Pool Is Restricted by Baseline Expression of Host Restriction Factors In Vitro
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