03.05 AID ELISPOT 酶聯免疫斑點分析儀

【ELISPOT技術原理】
酶聯免疫斑點技術（Enzyme Linked Immunospot Assay，簡稱ELISPOT）是細胞免疫學研究中更敏感的檢測方法，可以在單細胞水平對抗體分泌細胞(ASC)及細胞因子(CK)分泌細胞進行檢測，比ELISA和有限稀釋法等具有更髙的靈敏性，能從20萬-30萬細胞中檢岀1個分泌該蛋白的細胞。並且該方法能夠對抗原刺激後的活細胞進行功能性檢測，具有較髙的特異性、直觀可信度髙，並且易操作，已被廣泛用於分泌CK細胞檢測或ASC測定中，在國內外免疫學界獲得了廣泛的應用。

【德國AID酶聯免疫斑點分析儀】
德國AID公司多年來專注於聯免疫斑點分析儀的研發，自上世紀90年代起，AID公司就已經為世界各地科研、臨床、製藥實驗室提供了大量的酶聯免疫斑點分析儀（AID ELISPOT Reader），其在各領域文獻中的應用隨處可見，已經成為全球科研工作者認可的品牌。

應用AID酶聯免疫斑點分析儀對ELISPOT板上各孔斑點圖像進行全自動採集、計數及分析，不僅能夠自動得岀斑點數量，給出細胞因子分泌活性值，還能夠根據預設的判讀規則，直接得出陰陽性結果，並將結果輸出到JPG、EXCEL、TXT、PPT等中，還可與實驗室的LMS系統相連，進行數據的管理和輸出，成為值得信賴的ELISPOT分析工具。

此外，傳統ELISPOT也存在侷限，缺乏對T細胞產生的多種細胞因子的同時檢測。為克服此難題，以熒光標記為基礎，發展了熒光免疫斑點分析法（FluoroSpot)。用這種新的熒光免疫斑點分析技術可以在單一細胞水平檢測多細胞因子表達的淋巴細胞，如IFN-γ(綠色熒光標記)與IL-2(紅色熒光標記)共表達的T細胞。

德國AID iSpot Reader第一次實現了應用一臺酶聯免疫斑點分析儀同時進行傳統ELISPOT和熒光免疫斑點Fluorospot這兩種分析：AID iSpot Reader 對ELISPOT板上每孔的綠色熒光斑點(FITC標記IFN-γ)和紅色熒光斑點(Cy3標記IL-2)各採集一副圖像，經FluoroAID專利的熒光圖像 Overlay技術將兩幅圖像融合，保證共染色斑點計數的準確性。

【ELISPOT試劑盒種類】
AID酶聯免疫斑點分析儀採用全球著名的ELISPOT試劑生產商瑞典Mabtech的產品， 可用於人類、猴子、小鼠、大鼠細胞等多個物種，以及獸醫領域，檢測牛、羊、馬和豬源樣品的T/B細胞免疫反應。可檢測的細胞因子除了IFN-γ及白介素系列，還有TNF-α， Perforin， Granzyme B和MIP-1β等。

• 人： apoE， GM-CSF， Granzyme B， IFN-α(subt.2，8，10，14，17)， IFN-α(pan specific)， IFN-γ， IL-1β， IL-2，4，5，6，10， IL-12/-23(p40)， IL-12(p70)，13，17A，21，23，31， MIP-1β， Perforin， TNF- α；
• 猴子： IFN-γ， IL-2， IL-17；
• 小鼠： GM-CSF， IFN-α， IL-4，5，6， IL-12/-23(p40)， IL-13， IL-21， MIP-1β， Perforin， TNF-α. IFN-γ， IL-2， IL-17A；
• Lyme Spot， EBV-Spot， CMV-Spot， Trans Spot試劑盒；
• 更多T細胞/B細胞 ELISPOT及 Fluoro Spot試劑盒請諮詢。

【為什麼選擇ELISPOT？】
高靈敏度：20萬-30萬中1個陽性細胞檢測率；
直觀、可信度高：單細胞水平檢測，一個陽性細胞一個斑點，斑點數量代表分泌細胞因子的細胞數量多少，斑點大小代表該細胞分泌細胞因子水平的多少；
高通量：一塊ELISPOT板可作96test，科研工作者每天可檢測數百個樣品，只需少量細胞如45mL血液就足以用於測試600種不同抗原/肽類物質的反應；
活細胞功能檢測：檢測到的細胞因子不是已存在的，而是在檢測過程中，被加入的刺激物刺激而分泌出來的；

【已成功應用領域】
感染性疾病診斷與研究：
ELISPOT除了作為一種科研工具，也被用於臨床診斷。近期第一個被SFDA批准的基於ELISPOT法的診斷平臺(T-Spot.TB)上市。這項用於檢測結核感染的測試方法，是通過測量結核特異性抗原刺激後的IFN-γ分泌情況來檢測特異性的T細胞免疫反應。它可以代替傳統的皮膚測試，同時大大提高了敏感性和特異性，並且不受卡介苗接種影響。ELISPOT還可用於其他感染性疾病如乙型肝炎、丙型肝炎、EB病毒、鉅細胞病毒、萊姆病等的抗感染免疫研究與診斷。
疫苗研究：
ELISPOT方法是檢測和評價疫苗的細胞免疫水平的國際公認的標準工具。國際上普遍採用IFN-γ ELISPOT法監測HIV疫苗研究中的免疫應答反應，在國際艾滋病疫苗行動計劃中的大量監測新型HIV候選疫苗的試驗中採用ELISPOT法對評價T細胞功能。ELISPOT方法是通過測量疫苗誘導較強T細胞反應的能力，來定義疫苗的效果。在疫苗研發和設計時，可應用ELISPOT方法篩選確定抗原的特異性T細胞表位；這些信息還可以被用於評估合適的免疫策略以及免疫途徑。

中國藥品生物製品檢定所在《預防用DNA疫苗臨床前研究技術指導原則》及《預防用以病毒為載體的活疫苗製劑的技術指標原則》等規定中均指出，ELISPOT方法是檢測和評價疫苗細胞免疫效價的有效方法。ELISPOT技術作為檢測T/B細胞特異性分泌的更敏感方法，對於檢測數量較少的抗原特異性的記憶T細胞也尤為重要，已廣泛用於預防性疫苗和治療性疫苗，如艾滋病疫苗、乙肝疫苗、流感疫苗及各種腫瘤疫苗等的研製和評估。

自身免疫病研究：
ELISPOT的技術也廣泛應用於自身免疫疾病的診斷及病因研究，如I型糖尿病、多發性硬化、重症肌無力、系統性紅斑狼瘡等疾病病因分析、疾病的預測、早期診斷、指導治療以及預後分析等。
ELISPOT儘管主要用於T、B細胞分析，它還適用於任何想要在單細胞水平研究蛋白分泌的實驗。該方法對於那些效應細胞的數量是至關重要的或者具有生物學意義的實驗尤其適用，比如在LPS刺激PBMC後對分泌IL-6和IL-1β的單核細胞的量化分析；另外在分泌細胞數量特別少的研究中也尤其適用，比如漿細胞樣樹突狀細胞，它在血液中的數量特別少，但是應用 ELISPOT能夠很容易檢測到其在激活後分泌的IFN-α。
例如
藥物篩選：化合物和藥物免疫學反應的篩選；
腫瘤免疫研究：已用於分析和評價在癌症病人中誘導腫瘤特異的T細胞的疫苗試驗。治療前後特異性細胞免疫應答水平的檢測，可有效的評估治療效果，對於治療和用藥提供重要的參考信息。
移植免疫研究：移植中排斥反應的預測。
【AID酶聯免疫斑點分析儀型號】

自上市以來，全球已有超過1500家實驗室正在使用AID公司的酶聯免疫斑點分析儀，AID ELISPOT Reader硬件和軟件完全符合歐盟CE 認證，FDA 21CFR part11規範、GMP/GLP標準。

斑點圖像採集與計數：
全自動讀板，自動採集各孔圖像；自動計算斑點數量和斑點相關信息如大小、面積、光密度等。內置不同因子參數設置，直接調用；CountAID 功能協助優化讀數參數，並具有智能參數記憶功能。
結果分析：
直接判斷陰陽性檢測結果；診斷模塊AIDiagnostic，適用於臨床診斷用ELISPOT實驗的結果判讀，單獨輸出每例病人斑點圖像和結果報告；統計分析各孔斑點分佈、對比免疫反應強弱、細胞因子分泌量化比較等。
數據輸出與質控：
可輸出單孔圖像、任意孔及整板圖像；多種保存格式，Excel, Txt, PPT等；輸出數據可自定義包含斑點數,SFU,光密度強度, Activities，斑點分佈圖表等；包含質控模塊，操作歷史自動記錄，符合GLP規範。
2、AID iSpot Reader 熒光酶聯免疫斑點分析儀 （可見光/熒光雙重檢測功能的ELISPOT分析儀）

熒光雙色ELISPOT分析——FluoroS pot，採用專利的熒光圖像Overlay技術保證多色因子共分泌斑點準確識別，避免酶標雙色檢測中因不同細胞因子分泌量不均而引起的誤判。4-8位濾光片輪，全自動切換，至少標配FITC和Cy3熒光濾光片，其他波長可加配。

全自動判讀：
iSpot對板上每孔的各種顏色熒光斑點分別成像，例如檢測FITC標記的IFN-γ分泌情況和Cy3標記的IL-2分泌情況，軟件再自行將不同熒光圖像疊加（Overlay），準確識別共分泌（IFN-γ&IL-2）細胞。整個過程全自動，無需人工干預。

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