一、 HPLC試劑要求
甲醇，乙腈必須為色譜級純及以上級別，其他試劑也儘量使用色譜級純，試劑標籤上都會標有HPLC字樣。水為超純水或者購買商品化的的純淨水例如屈臣氏。
二、流動相配製注意事項
一般來說，溶劑的混合通常按體積比（V/V）。
體積混合有三種方式，例如95%乙腈水溶液：
方式1：可以用量筒量取乙腈950ml，再量取水50ml，兩種液體在瓶內充分搖晃混合。
方式2：可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然後用水定容。
方式3：可以先取50ml水到1L容量瓶中然後用乙腈定容。
這三種方式配置得到的流動相組成都是不同的，即使不考慮其他方面因素，保留時間也不會相同。一般情況推薦使用方式1 來配置流動相。
三、含緩衝鹽流動相的配製需注意的事項
配製緩衝鹽所使用的鹽試劑需為色譜純，稱樣需選擇量程適宜的天平且每天使用前對天平校正。流動相需過0.45μm或0.22μm濾膜過濾並超聲脫氣20min以上。若配有在線脫氣機可適當減少脫氣時間。
注意：不得將裝流動相的容器直接放置與超聲儀內（容易破碎），需放與篩網上進行超聲。
四、調節流動相pH值
採用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱鹼（7≤pKa≤8）樣品時，調節流動相的pH值的目的是為抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，並改善樣品的峰形。
（1）對於弱酸樣品，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小於弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和1%醋酸溶液。
（2）對於弱鹼樣品，情況相反。分析弱鹼樣品時，通常在流動相中加入少量弱鹼，常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和30mmol/L三乙胺溶液。流動相中加入有機胺可以減弱鹼性溶質與殘餘硅醇基的強相互作用，減輕或消除峰拖尾現象。所以在這種情況下有機胺（如三乙胺）也被稱為除尾劑或者減尾劑。
五、流動相的使用注意事項
1）所用流動相必須預先濾過和脫氣，流動相一般貯存於玻璃容器內。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發引起組成變化；
2）磷酸鹽、乙酸鹽緩衝液很易長黴，應儘量現配現用，不要長期貯存；
3）容器應定期清洗，特別是盛水、緩衝液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質沉澱和可能生長的微生物；
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