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CRISPR/Cas9系統的原理是利用gRNA特異性識別靶序列，並引導Cas9核酸內切酶對靶序列的PAM上游進行切割，從而造成靶位點DNA雙鏈斷裂，隨之利用細胞的非同源末端連接（NHEJ）或同源重組（HDR）的方式對切割位點進行修復，實現DNA水平的敲除、敲入或點突變。
通過核轉染法將gRNA、Cas9和Donor共轉入細胞中，進行藥篩，藥篩完成後挑選單克隆培養。選擇不同的克隆分別進行靶位點擴增及測序，篩選出敲入純合的陽性克隆。敲入熒光報告基因的也可以通過觀察熒光進行初步篩選。
源井生物科技
Crispr是什麼?是制導系統。
剪刀剪來剪去沒有什麼用。它可以帶著剪刀。就是這麼簡單。
問題是，這有什麼用?字符串是編碼蛋白質執行生物功能的基因。打結會使基因變短嗎?當它很短時，蛋白質不會出來(如果你感興趣，記得你高中生物老師的阿姨，哦，不，是一個代碼轉換突變，所以你可以刪除基因和蛋白質，看看發生了什麼，並推斷出基因和蛋白質的功能。
另一種方法，如果我替換?這時我準備了一根繩子，它和它很相似(請用百度同源重組和同源手臂)，但我偷偷地把一部分繩子花了一個紅圈，一個替換，原來沒有紅圈的繩子變成了一個圈。這樣，我們可以在不影響其他位置的情況下，精確地操作基因上的鹼基序列，實現了位點定向突變、插入序列、大片段置換等功能。
科學速覽
一般需要通過sgrna引導cas9蛋白到指定的敲入位置，對原始基因組進行切割，同時轉入帶有敲入位置附近基因組序列的donor質粒，該質粒同時帶有需要敲入的外源序列，這樣在cas9蛋白切割的同時，通過同源重組的方式把外源基因導入到基因組中。
