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CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。
通过核转染法将gRNA、Cas9和Donor共转入细胞中，进行药筛，药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序，筛选出敲入纯合的阳性克隆。敲入荧光报告基因的也可以通过观察荧光进行初步筛选。
源井生物科技
Crispr是什么?是制导系统。
剪刀剪来剪去没有什么用。它可以带着剪刀。就是这么简单。
问题是，这有什么用?字符串是编码蛋白质执行生物功能的基因。打结会使基因变短吗?当它很短时，蛋白质不会出来(如果你感兴趣，记得你高中生物老师的阿姨，哦，不，是一个代码转换突变，所以你可以删除基因和蛋白质，看看发生了什么，并推断出基因和蛋白质的功能。
另一种方法，如果我替换?这时我准备了一根绳子，它和它很相似(请用百度同源重组和同源手臂)，但我偷偷地把一部分绳子花了一个红圈，一个替换，原来没有红圈的绳子变成了一个圈。这样，我们可以在不影响其他位置的情况下，精确地操作基因上的碱基序列，实现了位点定向突变、插入序列、大片段置换等功能。
科学速览
一般需要通过sgrna引导cas9蛋白到指定的敲入位置，对原始基因组进行切割，同时转入带有敲入位置附近基因组序列的donor质粒，该质粒同时带有需要敲入的外源序列，这样在cas9蛋白切割的同时，通过同源重组的方式把外源基因导入到基因组中。
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