構建噬菌體推薦流程：
1.RNA提取：將用Trizol保存的外周血淋巴細胞轉移至1.5mL的離心管，加入1/5體積的氯仿混勻；室溫靜置5分鐘後4度12000g離心15分鐘；小心將離心後的上清液轉移到新的離心管；往新離心管中加入0.5-1倍體積的異丙醇；室溫靜置10分鐘後4度12000g離心10分鐘；使用與Trizol保存的外周血淋巴細胞等體積的75%乙醇清洗沉澱，4度7500g離心5分鐘後溶解於適量的無RNA酶的水中。
2.反轉錄cDNA：按照反轉錄試劑盒說明書將上一步得到的RNA反轉錄成cDNA。
3.擴增抗體片段：從反轉錄的cNDA中擴增特定的抗體片段使用Taq DNA Polymerase Hot Start酶進行PCR擴增。
PCR反應體系為：cDNA模板 2ul，ALPVH-C引物2ul，CALL002引物 2ul，10X Taq Buffer 5ul，dNTP 4ul， Taq（HS） 0.25ul，ddH2O補足到50ul。PCR的反應條件為：98度 3分鐘；95度 30秒，57度30秒，68度 40秒，每個循環增加2秒，重複22個循環；68度5分鐘。將得到的PCR擴增產物跑瓊1%脂糖凝膠電泳，可以看到一條1.0kb左右一條0.7kb左右的兩條條帶，對0.7kb大小的條帶切膠使用天根DNA純化回收試劑盒按說明書回收。
從上一步PCR擴增並回收後DNA片段中再次擴增特定的抗體片段使用Taq DNA Polymerase Hot Start Version酶進行PCR擴增。PCR反應體系為：DNA模板 2ul，Rvhh-FP引物 2ul，Rvhh-RP引物 2ul，10X Taq Buffer 5ul， dNTP 4ul， Taq（HS） 0.25ul， ddH2O補足到50ul。PCR的反應條件為：98度 3分鐘；95度 50秒，55度30秒，72度 40秒，重複12個循環；72度10分鐘。將得到的PCR擴增產物使用DNA純化回收試劑盒按說明書回收。
4.克隆至噬菌體質粒：將上一步擴增得到的抗體基因序列和噬菌體載體使用BglI酶切，酶切體系為：擴增基因12ug或者載體3ug， 10X BglI Buffer 3ul, BglI 4.5ul, 補足水到30ul。酶切在37度反應3-4小時。酶切後使用DNA純化回收試劑盒按說明書回收載體和擴增基因後進行連接反應。連接反應體系為：載體 200ng，擴增基因 80ng，T4連接酶 2ul，10X連接緩衝液 5ul，加水直至50ul。在4度過夜反應。將連接產物使用DNA純化回收試劑盒按說明書回收，並使用超純水溶解。
5.轉化SS320：將電轉杯置於冰上預冷，待SS320感受態細胞融化後加入1ul回收後的連接產物，將混合後的感受態細胞和連接產物轉移到預冷好的電轉杯中，使用電轉儀預設的Bacteria轉化程序電擊轉化，電轉後立即往電轉杯中加入1mL SOC培養基，將細胞37度復甦60分鐘後塗在含有四環素和氨苄抗性的LB培養板上過夜生長。
將上一步過夜生長後的培養板上的細胞用LB培養基和塗布棒沖洗刮下，加入20%的甘油後保存在-80度。
6.擴增和純化噬菌體文庫：將上一步刮下的數目約為10^9個細胞轉移到100mL預先加入四環素和氨苄抗生素的2X YT培養液中，37度220rpm培養直至OD600達到0.5。按照輔助噬菌體：細菌細胞數目為20:1的比例加入輔助噬菌體後繼續37度培養30分鐘。加入終濃度為的卡那黴素和0.2mM 的IPTG，30度過夜培養。
將過夜培養的細胞4度13000rpm離心5分鐘，將上清轉移到新的離心管後加入1/4體積預冷的 5X PEG8000/NaCl，在冰上孵育30分鐘。4度13000rpm離心10分鐘去除上清後加入1mL PBS緩衝液溶解沉澱。再次加入250ul 5X PEG8000/NaCl 後冰上孵育10分鐘，4度16000g離心15分鐘後去除上清並將沉澱溶解在1mL PBS中得到噬菌體庫。
