《鼠年說鼠》系列文章，每週二更新，專門解答大小鼠鏟屎官們在養鼠過程中經常遇到的繁育與鑑定類的問題，同時向大家徵集問題，任何基因編輯鼠飼養繁殖或鑑定的困惑統統可以丟給小賽，小賽會給您回覆或統一在後面的內容為大家做出詳細的解答。今天我們就開始第九期的內容吧～
完全性基因敲除、基因敲入（點突變）鼠如何建系？
區別：
1. 轉基因
轉基因項目具有插入位點及拷貝數不確定的特點，獲得的F0代鼠可能各不相同，F0代不能相互交配。需要將F0與野生型多傳幾代，待基因型穩定後通過其他實驗手段篩選出優先傳代的品系繼續繁殖。
2. CRISPR/Cas9技術構建的完全性基因敲除、基因敲入（點突變）鼠
CRISPR/Cas9技術構建的F0代陽性鼠由於切割效率和非同源修復可能會出現不同的line，需要與野生型鼠交配獲得穩定基因型的F1代陽性鼠。不同line的後代同樣不建議相互交配。
條件性敲除（敲入）鼠如何建系？
F0代與野生鼠互配獲得F1代雜合子，F1代雜合子（flox/+）互配得到F2代純合子（flox/flox），F2代純合子（flox/flox）與全身/組織特異性工具鼠交配獲得F3代（flox/+, Cre），F3代（flox/+, Cre）互配得到F4代（flox/flox, Cre），即cKO/cKI純合子。
條件性的項目需要與全身/組織特異性工具鼠交配達到目的，所以在繁殖過程中可根據全身/組織特異性工具鼠自身的特點安排繁殖。
備註：
1. 如果是通過打靶構建的全身/組織特異性工具鼠，要注意選擇與目的基因不在同一條染色體上，以免繁殖不到cKO/cKI純合子。
2. 有生殖細胞洩露風險的Cre工具鼠，繁殖時按照建議性別選擇不同基因型鼠。
3. 誘導型的Cre工具鼠，需要加藥後才能實現特異組織刪除。
4. F1代若有剩餘的flox雜合鼠（flox/+），或想要加快獲得目標鼠，第2步可以用flox/+直接配Cre工具鼠，可縮短一代週期。
即使是組織特異性工具鼠，也可能在其他組織有洩露表達的風險。
往期回顧
如何提取組織DNA模板？
