戊戌政變後，光緒帝被慈禧“廢黜”，度過了10年沒有人身白由的“囚帝”生活，長期憂悶，無處發洩，於光緒三十四年(1908年)十月二十一日，死於西苑(今中南海)瀛臺涵元殿。
有學者根據清宮醫案記載認為:光緒帝一直身體不好，體弱多病。從現代醫學角度來說，光緒帝患有嚴重的神經官能症、關節炎和骨結核等疾病，這是光緒壯年死亡的直接病因。從他開始病重，一直到臨死，病況逐漸加劇，既沒有中毒的跡象，也沒有暴死的症象，屬於正常死亡。
光緒皇帝雖然體弱多病，但醫藥條件極好，不會突然死亡。而光緒皇帝在慈禧死去的前一天突然駕崩，無不讓人懷疑他的死因。所以光緒帝被人謀害致死的說法也不是空穴來風。
一說是慈禧臨終前派人毒死光緒。慈禧太后怕自已身後光緒重新執政，推翻前案，倒轉局勢，於是令人下毒手，將光緒害死。第二種說法是李連英毒死光緒。他們怕慈禧死後光緒重掌政權，對自已不利，就先下毒手。第三種說法是袁世凱毒死光緒。因為在戊戌變法時，辜負了光緒帝的信任，在關鍵時刻出賣了皇上，擔心慈禧太后死去，光緒決不會輕饒他，就借送藥的機會，暗中下毒，將光緒毒死。第四種說法是不知姓名之人毒死光緒。曾做過清宮御醫的屈貴庭，在民國間雜誌《逸經》上說:在光緒臨死的前三天，他最後一次進宮皇上看病，發現皇上病情已逐漸好轉，沒過幾天，就突然惡化而死。雖不能斷定是誰害死了光緒，但肯定光緒是被人暗中害死的。
從清代官方文獻和宮廷檔案來看:光緒是病死的。但從光緒死的時間只比慈禧早了一天來看，人們的懷疑也不無道理。但到今天為止，也只是猜疑。光緒的死因，已成歷史之謎。
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