雞馬立克氏疫苗和外源病毒的檢測方法

馬立克氏病

馬立克採樣方法，活雞或者抗凝血採樣。

HVT能羽毛囊散毒可以用羽毛直接檢測

馬立克疫苗：

1:市場使用HVT凍幹苗，CVI988液氮活細胞苗。

一價苗包括MDV-1（CVI988,R2/23)和HVT(FC126)

二價苗包括天然無毒的（SB-1,301B-1)。和HVT聯合使用。哈獸研814

三價苗是在二價苗的基礎上加上MDV-1。

2:疫苗存在的問題，廠家為增強病毒抗原性和複製速度而去回傳雞。

細胞苗是要先分裝，再檢測細胞中病毒含量。廠家選擇蝕斑數來看病毒含量，一隻腳選擇3000蝕斑數。國外選擇5000-10000。蝕斑數回根據種子細胞代次來決定，代次越低，越不容易產生蝕斑。選疫苗要選擇種子細胞低代次蝕斑數越高越好。

疫苗外源性病毒汙染

主要是白血病（絕大多數是A亞型汙染，J亞型發現在2014年），法氏囊，禽流感（h7，h9）。

外源性病毒汙染檢測方法

先讓外源病毒富集，選擇種雞接種已知接種疫苗來產生大量抗體。來中和接種含有外源病毒的疫苗，使外源病毒在雞體內富集。再採樣。因為外源病毒含量很少。一個雞胚可以生產10000羽份的疫苗。

SPF雞檢查法，細胞檢查法，雞胚檢查法，核酸檢查法。

SPF雞檢測抗體：這是檢測疫苗有無外源病毒

細胞培養上進行病毒分離鑑定，將疫苗接種到相應細胞上分離病毒，經過一定傳代後通過一定的方式確定病毒存在與否。檢測ALVP27抗原（國標），特異性抗原用IFA檢測，核酸檢測技術確定病毒存在。

FPV和MDV以及NDV等疫苗接種細胞後會產生細胞病變，導致汙染的外源病毒檢測不到。

0.2um的過濾網可以過濾掉病毒。

案例：雞痘耐熱保護劑疫苗分離一株ALV

取1000羽疫苗，用適量不含血清的M-199培養液溶解，使最終為500羽/ml 。2-8度，12000轉離心10分鐘。上清液經0.8，0.45，0.22，0.1um過濾一次。取濾液2ml，盲傳三代檢測P27。

案例：雞痘弱毒疫苗汙染REV的分離鑑定。將懷疑汙染REV的疫苗腹腔接種到FPV母源抗體為陽性的SPF雛雞（1ml/只）置於隔離罩飼養，同時將未接種疫苗的同批次SPF雞作為對照組。五天後，兩組試驗組採抗凝血，離心接種CEF細胞，置於5%二氧化碳，37度培養箱中培養，連續傳2代。用單克隆抗體MAb11B118做間接免疫熒光試驗。