05.30 「發明專利公佈」一種白及種子的繁殖方法

(12)發明專利申請

(21)申請號 201310085109.5

(22)申請日 2013.03.15

(71)申請人 浙江中醫藥大學

地址 310053 浙江省杭州市濱江區濱文路

548 號

(72)發明人 丁志山蔣福升李偉平呂迪 黃傑程東慶黃燕芬陳宜濤

(74)專利代理機構 杭州天正專利事務所有限公 司 33201

代理人 黃美娟冷紅梅

(43)申請公佈日 2013.06.26

(54) 發明名稱

一種白及種子的繁殖方法

(57) 摘要

本發明提供了一種白及種子的繁殖方法，所 述方法包括 ：（1）將採集的白及種子播種至適宜 的土壤介質中，並澆淋適量 1/2MS 無糖培養液 ；

（2）種子播種後，控制白天生長溫度為 15 ～ 25℃， 空氣相對溼度保持在 70% 以上，上方用塑料薄膜 覆蓋，並設置遮陽網進行遮陰 ；（3）種子播種一週 後除去遮陽網，定時噴霧營養液並適時澆水保持 溼潤 ；（4）種子播種一個月後施適量磷肥，並適時 澆水除草，直至地下長出球莖後進行移栽。採用本 發明方法，可在短時間內大量繁育白及的種苗，有 效滿足種植業對種苗的需求。

CN 103168590 A

權利要求書

1/1 頁

1. 一種白及種子的繁殖方法，所述方法包括 ：

（1）將採集的白及種子播種至適宜的土壤介質中，並澆淋適量 1/2MS 無糖培養液 ；

（2）種子播種後，控制白天生長溫度為 15 ～ 25℃，空氣相對溼度保持在 70% 以上，上方 用塑料薄膜覆蓋，並設置遮陽網進行遮陰 ；

（3）種子播種一週後除去遮陽網，定時噴霧營養液並適時澆水保持溼潤 ；所述營養液組 成如下 ：6- 苄氨基嘌呤 0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0 ～ 1.0mg/L，溶劑為 1/2MS 或 MS 無糖培養 液 ；

（4）種子播種一個月後施適量磷肥，並適時澆水除草施肥，直至地下長出球莖後進行移 栽。

2. 如權利要求 1 所述的方法，其特徵在於所述白及種子先在添加 0 ～ 2.0mg/L6- 苄氨 基嘌呤的 1/2MS 或 MS 培養液中培養 1 ～ 2 個月，得到萌發後的白及種子再播種至土壤介質 中。

3. 如權利要求 1 所述的方法，其特徵在於步驟（1）所述土壤介質為泥炭土。

4. 如權利要求 1 所述的方法，其特徵在於步驟（1）所述土壤介質為營養土、蛭石、珍珠 巖質量比 20 ：1 ～ 5 ：1 ～ 5 的混合物。

5. 如權利要求 1 所述的方法，其特徵在於步驟（3）所述營養液組成如下 ：6- 苄氨基嘌 呤 1.0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0.5 ～ 1.0mg/L，溶劑為 1/2MS 或 MS 無糖培養液。

一種白及種子的繁殖方法

( 一）技術領域

[0001]本發明涉及一種白及種子的繁殖方法。

（二）背景技術

[0002] 白及為蘭科植物白及（Bletilla sfriata(Thunb.)Reiehb.f.）的乾燥塊莖，大多 野生於山野川穀的向陽山坡、疏林中、草叢中，喜歡陰涼的溼度較大的環境，土壤肥沃疏鬆 而又排水良好的夾沙土。所以，要求生存環境獨特的白及的資源是有限的，目前，野生資源 的產地僅剩下雲、貴、川、湘等極其有限的少數地域的偏遠山野。

[0003]白及為多年生草本，植株矮小（未經人工選育的野生種質資源），紫花白及高 30 釐

米左右，四川峨眉白花大白及高 33 釐米以上。白及葉 3-6 片，長披針形，中部稍寬，先端尖。

白及 3 月萌發，花期 4-5 月，果期 8-10 月。12 月倒苗。白及雖然結果，但是，卻不能依靠種 子繁衍。成熟的白及種子呈橄欖型，黃色粉沫狀，非常細小，種皮為單層細胞組成，側壁加 厚，細胞器及原生質均已消失，是一層半透明的死細胞，胚橢圓型，未分化，為原胚階段，胚 柄退化，無胚乳。在自然狀態下，極少萌發成苗。目前，白及目前主要依靠塊莖繁殖，是典型 的 1+1=2 繁殖方式。長期無性繁殖，不僅繁殖速度慢，而且與耗種量大，還與用藥爭奪原料， 長期無性繁殖，易引起種性退化，很難適應規模化種植的需要。而且土地連年耕作，白及鱗 莖積累了大量病毒，嚴重影響了其產量和品種。

[0004] 為此，有學者試圖通過組織培養的方式，以解決白及繁殖效率低及病毒感染等問 題，並且已經取得了可喜成績。然而，總結白及組培快繁生產技術，存在以下問題 ：白及鱗 莖、莖段含有大量內生真菌及病毒，組培汙染率高，成功率低 ；利用白及莖尖生長點和種子 組培雖然成功率高，但從脫分化、增殖、分化、煉苗直到移栽週期長，至少 5 個月左右（蘭科 植物生長普遍緩慢），而且期間要更換好幾次培養基，工作量大，成本及技術含量高，一般企 業和個體戶藥農根本做不到 ；為此，仍然沒有根本性解決白及存在的問題，至今白及價格一 直呈現上漲趨勢或許是最好也是最直接的印證。為此，仍然有必要尋求更好、更經濟便捷的 繁殖和種植技術方法，擴大生產以滿足市場需求。

[0005]目前，白及人工繁育的研究工作進展十分緩慢，這是白及野生改家種研究的一個 關鍵課題。這種生長環節的奧秘性超越了絕大多數生產者的認識水平，由此可知，目前白及 家種只能以假鱗莖為種苗，並且只有當年生，具有老杆和嫩芽的假鱗莖才能發展成新植株。 白及發展家種，必須要面臨種子秧苗稀缺的困境。再者這種傳統的分株繁殖方式，不可避免 地產量低下，抗病蟲害能力差，一代一代退化。由於種苗緊缺，大規模產業化種植就目前來 說還遙不可及。

（三）發明內容

[0006]本發明針對白及繁殖效率低、大多依靠無性繁殖的問題，提供了利用種子繁殖快 速高效培育優質種苗的方法。

[0007]本發明採用的技術方案是 ：

[0008] 一種白及種子的繁殖方法，所述方法包括 ：

[0009] （1）將採集的白及種子（每年 8 ～ 9 月採集）播種至適宜的土壤介質中，並澆淋適 量 1/2MS 無糖培養液 ；白及種子細小無胚乳，所以需播種與泥炭土、營養土等有機質豐富的 土壤中 ；白及種子在播種之前，通常需要經消毒處理，可直接對蒴果進行消毒，也可將蒴果 中的種子取出後進行消毒 ；

[0010]（2）種子播種後，控制白天生長溫度為 15 ～ 25℃，空氣相對溼度保持在 70% 以上， 上方用塑料薄膜覆蓋，並設置遮陽網適當遮陰 ；

[0011] （3）種子播種一週後除去遮陽網，定時噴霧營養液並適時澆水保持溼潤（每週一 次，每次 200 ～ 1500mL/m2）；所述營養液組成如下 ：6- 苄氨基嘌呤 0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0 ～ 1.0mg/L，溶劑為 1/2MS 無糖培養液或 MS 無糖培養液 ；

[0012] （4）種子播種一個月後施適量磷肥（如過磷酸鈣，用量為 5 ～ 15g/m2），並按常規方

法進行科學管理，適時澆水除草施肥（如花寶 1 號，用量為 0.2 ～ 0.8g/m2），直至地下長出球 莖後進行移栽。

[0013] 優選的，所述白及種子先在添加 0 ～ 2.0mg/L6- 苄氨基嘌呤（為 0 則不添加，優選 1.0mg/L）的 1/2MS 培養液或 MS 培養液中培養 1 ～ 2 個月，得到萌發後的白及種子再播種至 土壤介質中。

[0014] 步驟（1）所述土壤介質為泥炭土。

[0015]步驟（1）所述土壤介質為營養土、蛭石、珍珠岩質量比 20 ：1 ～ 5 ：1 ～ 5 的混合物。 [0016]步驟（3）所述營養液組成如下 ：6- 苄氨基嘌呤 1.0 ～ 2.0mg/L，1- 萘乙酸 0.5 ～ 1.0mg/L，溶劑為 1/2MS 無糖培養液或 MS 無糖培養液 ；

[0017] 在本發明中，MS 培養液及 MS 無糖培養液配方舉例如下 ：

[0018]大量元素母液 ：NH4NO316.5g ；MgSO4·7H2O3.7g ；KH2PO41.7g ；KNO319g，加水溶解，定 容至 500ml ；

[0019] 鈣鹽母液 ：CaCl23.32g，加水溶解，定容至 500ml ；

[0020] 微 量 元 素 母 液 ：KI0.0415g ；Na2MoO4·2H2O0.0125g ；H3BO30.31g ；

CuSO4·5H2O0.00125g ；MnSO4·H2O0.845g ；CoCl2·6H2O0.00125g ；ZnSO4·7H2O0.43g，加水溶

解，定容至 500ml ；

[0021] 鐵鹽母液 ：EDTA 二鈉 3.725g，加 100ml 水加熱溶解，FeSO4·7H2O2.785g，加 100ml

水溶解後兩者混勻，加水配成 500ml ；

[0022]維生素母液 ：鹽酸吡哆醇（VB6）0.025g ；鹽酸硫胺素（VB1）0.025g ；煙酸 0.025g， 甘氨酸 0.1g，加水溶解，定容至 500ml ；

[0023]配 1LMS 培養液 ：取大量元素母液 50ml，鈣鹽母液 50ml，微量元素母液 10ml，維生 素母液 10ml，鐵鹽母液 5ml，加肌醇 0.1g，蔗糖或白砂糖 20 ～ 30g，蒸餾水定容至 1L。 [0024]配 1LMS 無糖培養液 ：取大量元素母液 50ml，鈣鹽母液 50ml，微量元素母液 10ml， 維生素母液 10ml，鐵鹽母液 5ml，加肌醇 0.1g 配 1LMS 培養液 ：取大量元素母液 50ml，鈣鹽 母液 50ml，微量元素母液 10ml，維生素母液 10ml，鐵鹽母液 5ml，加肌醇 0.1g，蔗糖或白砂糖 20 ～ 30g。

[0025] 1/2MS 培養液指溶液中所含的大量元素和鈣鹽為 MS 培養液的一半，其他不變。

[0026] 1/2MS 無糖培養液指溶液中所含的大量元素和鈣鹽為 MS 無糖培養液的一半，其他

不變。

[0027]白及雖然結果，但是，卻不能依靠種子繁衍。成熟的白及種子呈橄欖型，黃色粉沫 狀，非常細小，種皮為單層細胞組成，側壁加厚，細胞器及原生質均已消失，是一層半透明的 死細胞，胚橢圓型，未分化，為原胚階段，胚柄退化，無胚乳。在自然狀態下，極少萌發成苗。 目前，白及目前主要依靠塊莖繁殖，是典型的 1+1=2 繁殖方式。白及人工繁育的研究工作 進展十分緩慢，這是白及野生改家種研究的一個關鍵課題。這種生長環節的奧秘性超越了 絕大多數生產者的認識水平，由此可知，目前白及家種只能以假鱗莖為種苗，並且只有當年 生，具有老杆和嫩芽的假鱗莖才能發展成新植株。白及發展家種，必須要面臨種子秧苗稀缺 的困境。再者這種傳統的分株繁殖方式，不可避免地產量低下，抗病蟲害能力差，一代一代 退化。由於種苗緊缺，大規模產業化種植就目前來說還遙不可及。利用本發明，可在一年時 間內得到大量的白及優質種苗。

[0028]本發明的有益效果主要體現在 ：採用本發明方法，可在短時間內大量繁育白及的 種苗，有效滿足種植業對種苗的需求。

（四）具體實施方式

[0029]下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護範圍並不僅限於 此 ：

[0030]實施例 1 ：

[0031]1) 於 8 月底採集成熟未開裂的白及蒴果 ；

[0032] 2) 將蒴果切開，取出其中的種子，在水中浸泡兩天，播種到泥炭土中，澆透水，上方 用地膜覆蓋後再蓋一層遮陽網，種子播種的環境為人工單棟大棚，大棚頂部遮陽網覆蓋，大 棚中每日定時噴水，保持溼度在 70% 以上 ；

[0033]3) 種子播種一週後去除表面覆蓋的遮陽網，每週噴霧一次 1/2MS 無糖培養液（每 次約 800mL/m2），並適時澆水，忌乾燥缺水。

[0034]4) 種子播種一個月後去除表面覆蓋的薄膜，並澆 10g/L 的過磷酸鈣（約 1000mL/ m2），以促進幼苗的生根。

[0035]5) 在此之後進行科學的管理，主要是適時澆水除草，噴施頁面肥，（花寶 1 號，1000 倍稀釋，每兩週於莖葉部噴灑 1 次，約 500ml/m2），一年後可得地下具球莖的白及幼苗。 [0036]實施例 2 ：

[0037] 具體方法同實施例 1，與實施例 1 不同的是，步驟 2）中的白及蒴果先用 75% 酒精和 0.1% 昇汞消毒後切開蒴果，得白及無菌種子，播種到 1/2MS 培養液中培養一個半月，用紗布 過濾，得萌發後的白及種子，然後播種到泥炭土中。步驟 3）中所用營養液為 1/2MS 無糖培 養液 +1.0mg/L1- 萘乙酸和 +2.0mg/L6- 苄氨基嘌呤 ；

[0038]按照上述方法，一年後可得地下具球莖的白及幼苗。

[0039]實施例 3 ：

[0040]具體方法同實施例 2，與實施例 2 不同的是，白及種子萌發時播種的營養液為 MS 培 養液 +1.0mg/L6- 苄氨基嘌呤。

[0041]按照上述方法，一年後可得地下具球莖的白及幼苗。

[0042]實施例 4 ：

[0043]具體方法同實施例 2，與實施例 2 不同的是，步驟 2）中種子萌發後播種到營養土 ： 蛭石 ：珍珠岩為 20 ：1 ：1。

[0044] 按照上述方法，一年後可得地下具球莖的白及幼苗。

[0045] 最後，還需注意的是，以上實施例子僅是本發明的若干個具體實施例子，本發明不 限於上述的實施例，還有許多變形，本領域相關的人員能從本發明內容中直接導出或者聯 想出的所有變形，均認為是本發明的保護範圍。