1 蘋果病毒病的研究概況
1933 年，Bradford 和Joley 首次發現了蘋果花葉病毒症狀。之後，蘋果病毒病開始受到歐美一些國家研究人員的關注， 從20 世紀40 年代開始專門對果樹病毒病進行觀察、檢測和研究。我國蘋果病毒病的研究起步較晚，從20 世紀中期才開始進行相關研究。 直到60 年代初期，國內研究人員才對蘋果花葉病和鏽果病等蘋果病毒病的特點、傳播方法和防治技術進行了初期的研究。1978年，我國從國外引進一些病毒指示植物，真正開展了蘋果病毒病研究。 到目前為止，全球已檢測出40 多種蘋果病毒， 近年來發現了幾種新的蘋果類病毒，如蘋果凹果類病毒(ADFVd)，該病毒在‘Starking delicious’ 蘋果上有明顯的凹果症狀，其基因序列包含306 個核苷酸，在我國山東和新疆的蘋果樣品中檢測到該類病毒。2015 年，我國研究學者首次發現1 種雙生病毒(AGV)。 此外，還新發現一些病毒或類病毒， 如蘋果錘頭狀類病毒 （AHVD-likeRNA）、 蘋果壞死花葉病毒（APNMV）和蘋果腫枝病毒（AaLV）等。
根據病毒在果樹體內不斷繁殖，但沒有顯著症狀的潛隱性特性，將病毒分為潛隱性病毒和非潛隱性病毒兩大類。 我國共檢測出了19 種蘋果病毒，據我國技術監督局發佈的《蘋果無病毒母本樹和苗木檢疫規程》規定，如今鑑定出6 種蘋果病毒病：蘋果褪綠葉斑病毒(ACLSV)、蘋果莖痘病毒(ASPV)、蘋果莖溝病毒(ASGV)、蘋果花葉病毒(ApMV)、蘋果鏽果類病毒(ASSVd)和蘋果綠皺果病毒(AgrCV)，其中前3 種是潛隱性病毒，後3種是非潛隱性病毒。蘋果潛隱性病毒單獨或混合侵染樹體，混合侵染率較高，病毒侵染蘋果樹後，一般不表現典型症狀，外觀上不易識別，但會影響嫁接親和性，而且混合侵染率高，造成樹勢衰弱、產量下降等問題。 蘋果非潛隱性病毒，通常在蘋果栽培品種上都能表現出典型的症狀， 容易識別，對樹體危害很大。 如今在西北、東北、華北等各蘋果園區，都已檢測到非潛隱性病毒。
2 蘋果病毒病的發生原因和防治方法
2.1 發生原因
樹體營養不足或樹勢衰弱都會使樹體容易感染病毒，如施肥不合理，土壤沒有改良或通透性差，樹體負載量過大，留枝量過多等都會導致病毒的發生。此外，蘋果病毒還有很多傳播方式，如通過嫁接、接穗或砧木等傳播，也可通過人為傳播，因修剪工具接觸而傳染病毒，還可通過根系接觸或昆蟲傳播。
2.2 防治方法
2.2.1 栽植無病毒苗木 栽植無病毒苗木是控制蘋果病毒病傳播、擴散和危害的最實用有效的方法。 加強從脫毒技術到無病毒苗木原種，到母本園的建立，再到大量繁植無毒化苗木等一系列體系的執行力度， 嚴禁從疫區調購蘋果苗木，並嚴格按照市場蘋果苗木生產的要求，進行無毒化栽培管理。
2.2.2 農藝措施 可通過合理修剪樹體，消除大小年現象，調整果樹結構，改善通風透光條件等來增強樹勢；並通過改良土壤性狀，加強果樹根系吸收，施用有機肥料等方法促進蘋果樹健壯生長。發現感染病毒的衰弱樹和鏽果病病樹後應立即刨除，輪作2 年後更換新的無病毒果樹。 對有病毒的樹做特殊標記，並且在修剪和疏花疏果時使用專門的修剪工具，避免和健壯的蘋果樹共用修剪工具，或者對修剪病樹後的工具進行消毒處理，預防交叉感染，防止病毒傳播。 在進行嫁接和高接換種時，從健壯的果樹上取接穗或購買高質量的接穗，不在感染病毒的果樹上嫁接無病毒接穗或在健康的砧木上嫁接帶毒接穗。
2.2.3 藥劑防治 及時防治葉蟬等刺吸式害蟲，防止病毒不斷擴散， 應儘量將蟲害在為害前除掉。 用藥劑對土壤進行消毒，採用全園噴施藥劑或剪鋸口塗藥劑， 可有效地預防蘋果樹感染病毒。藥劑可選擇鹽酸嗎啉胍、氯溴異氰尿酸、氨基寡糖素等。此外，還有一些抗病毒藥劑，比如病毒A、寧南黴素等，噴施這些藥劑後對病毒症狀有減緩作用，可以交替輪流使用。
3 蘋果脫毒技術
推廣栽培無毒苗木是防治蘋果病毒病最有效的方法。 目前，蘋果脫毒技術主要包括熱處理脫毒、莖尖培養脫毒、莖尖培養結合熱處理脫毒、化學脫毒、微體嫁接離體培養脫毒和超低溫脫毒等。
3.1 熱處理脫毒
研究發現病毒和寄主細胞耐高溫能力有一定的差異，利用這一原理，熱處理脫毒時選擇利於寄主細胞生長而不利於病毒的溫度，以此達到控制病毒擴散的目的， 從而得到無病毒的新梢。現在常用的方法是將已經感染病毒的植株置於35～38 ℃的熱空氣中，通過變溫及恆溫的方法對組培苗或盆栽苗進行處理。 變溫是指通過晝高夜低的控制方式，提高植株的存活率，一般高溫時間越長，脫毒率越高。 熱處理脫毒的優點是操作簡單方便，缺點是耗時過長，且不能徹底脫毒，尤其對一些耐熱性較強的病毒和耐熱性較差的植物來說作用不大。
3.2 莖尖培養脫毒
莖尖培養脫毒的原理是病毒繁殖速度比分生組織細胞分裂速度慢，且病毒無法在分生組織擴散，使病毒在植株內分佈不均勻，莖尖組織可能沒有感染病毒，以此來脫除病毒。 現有研究提出，莖尖無毒可能是因為病毒在具有分生能力的莖尖細胞中發生了RNA 沉默。 並且指出莖尖大小與莖尖培養成活率成正比，與脫毒率及變異可能性成反比，莖尖太小，脫毒的再生率不高，而如果所取莖尖大於0.2 mm， 則不易徹底脫毒。像ASGV 和ACLSV 等可以感染莖尖頂端的分生組織的病毒，目前僅用莖尖培養難以完全脫除。
3.3 莖尖培養結合熱處理脫毒
由於熱處理對有些植物的脫毒效率低且不能完全脫毒，而莖尖培養的再生率不高，所以可將這兩種脫毒技術結合起來， 提高脫毒成功率。先把帶毒試管苗放在37 ℃的恆溫下處理28 d，切取下約0.5 mm 莖尖（包含1～3 片葉原基）進行脫毒培養。 莖尖培養結合熱處理有效提高莖尖的成活率和脫毒率，特別有利於僅用其中一種方法無法徹底脫毒的植物。
3.4 化學脫毒
化學脫毒主要是通過抑制病毒複製和誘導寄主產生抗病性的方法來進行脫毒。化學藥劑有甘草酸和黃酮等天然抗病毒物質，以及2，4-二羰基六氫-1，3，5-三嗪（DHT）和病毒醚等核酸類似物物質。常用的化學藥劑為病毒醚，研究發現，病毒醚的濃度大於40 mg/L，寄主會發生藥害，但這與品種和品種的基因也有關，部分品種當病毒醚濃度大於或等於100 mg/L 時， 卻不發生藥害。利用病毒醚脫毒已培養出多種無病毒蘋果苗木，值得注意的是操作過程中需要嚴格控制濃度。濃度太低，無法抑制病毒，太高，對苗木傷害大，甚至使植物變異， 而且植物不能產生病毒抗體，所以僅用病毒抑制劑不能徹底脫毒，通常要結合莖尖培養或熱處理脫毒。 研究發現，將其與莖尖培養或熱處理相結合，可脫除ASGV、ACLSV、ASPV等多種病毒。
3.5 微體嫁接離體培養脫毒
微體嫁接是指通過人工培養基栽培出實生苗的砧木，從無病毒苗木上取0.15～1.0 mm 的莖尖，然後在砧木的切斷面上通過試管微體嫁接得到無病毒的幼苗。 在此之前，先高溫處理接穗一段時間，提高脫毒率。 微體嫁接砧木可直接用試管苗， 但是由於花粉和種子可能會傳播病毒，所以要先對砧木進行脫毒。 影響微嫁接成活率因素包括接穗來源、莖尖大小和病毒種類等。而莖尖大小與微嫁接的成活率成正比， 與其脫毒率成反比，所以，不易嫁接，且脫毒率和成活率不高，操作也不易完全掌握，實際應用難度較大。
3.6 超低溫脫毒
超低溫脫毒是將組織培養與超低溫保存結合來進行脫毒。 超低溫脫毒是一種新的脫毒方法，植物莖尖在經過液氮處理後，帶病毒區域的細胞被殺死， 而沒有感染病毒的細胞成活再生。 一般在超低溫環境條件下，絕大多數細胞的基本代謝和生長都會停止， 在這種情況下，植物能在相對穩定的生物學形態中比較完整的保存下來。存活下來的沒有感染病毒的頂端分生組織經過再生培養出脫毒苗木。超低溫脫毒也可結合莖尖培養脫毒，能快速脫毒，且耗時短，並且其遺傳基因穩定，不需要特殊設備，是一種快速高效的脫毒方法。
4 問題與展望
蘋果病毒病是系統侵染性病害，主要通過嫁接等無性繁殖方式傳播，果樹感染病毒後，病毒將始終在樹體內繁殖和危害，破壞果樹的營養和經濟價值。 目前全球還沒有完全有效的藥劑可以抑制病毒病的發生，病毒病危害愈加嚴重。 針對此現狀，應大力繁育栽培無毒苗，推廣無毒化栽培管理技術。 但是由於果樹市場存在監管不嚴、工作人員生產技術不合理等問題，市場上真正可以投入到生產上的無毒苗不多， 因此我國急需規範統一蘋果無毒苗生產體系， 加強市場監管， 重視蘋果病毒病的研究、 檢測和防控工作，嚴格檢疫，大範圍的推廣無毒苗木，通過源頭控制蘋果病毒病， 才能夠有效阻止病毒病的蔓延，從而提高蘋果的經濟效益，促進我國蘋果產業快速發展。
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