摘要：
文題釋義：
胚胎幹細胞：是一類起源於胚胎髮育早期囊胚內細胞群中未分化的細胞，具有自我更新、無限增殖和多向分化的潛能。
轉染：是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。
背景：現有方法將外源分子如DNA導入到人胚胎幹細胞用於科學研究的效率普遍較低，如何優化現有條件，提高轉染效率顯得尤為重要。
目的：比較兩種不同的傳代方法對人胚胎幹細胞系H9轉染效率的影響，優化胚胎幹細胞轉染條件。
方法：人胚胎幹細胞系H9分別採用小克隆傳代法和單細胞傳代法進行傳代，傳代後繼續培養細胞48 h，用Lipofectamine 3000轉染pAdTrack-AKT1熒光質粒2 d後，熒光顯微鏡下觀察熒光質粒的表達，流式細胞儀檢測人胚胎幹細胞的轉染效率；RT-qPCR和Western blot分別檢測轉染後AKT1在mRNA和蛋白質水平的表達。
結果與結論：①熒光顯微鏡下觀察發現單細胞傳代組表達熒光質粒的細胞數量更多，流式細胞儀檢測單細胞傳代法的轉染效率[(47.18±2.00)%]高於小克隆傳代法的轉染效率[(19.52±0.86)%]，差異有顯著性意義 (P < 0.01)；②單細胞傳代組轉染後AKT1 mRNA和蛋白的表達均高於小克隆傳代組，差異有顯著性意義 (P < 0.01)；③結果表明，採用單細胞傳代法，增加細胞與轉染試劑脂質體的接觸面積可提高人胚胎幹細胞的轉染效率。
ORCID: 0000-0002-1800-8057(孫莉)
中國組織工程研究雜誌出版內容重點：幹細胞；骨髓幹細胞；造血幹細胞；脂肪幹細胞；腫瘤幹細胞；胚胎幹細胞；臍帶臍血幹細胞；幹細胞誘導；幹細胞分化；組織工程
關鍵詞: 人胚胎幹細胞, 小克隆傳代法, 單細胞傳代法, 脂質體轉染, 轉染效率
文章來源: 孫 莉, 縱豔豔, 魏建峰. 兩種傳代方法影響人胚胎幹細胞轉染效率的比較[J]. 中國組織工程研究, 2019, 23(36): 72-76.
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