​質粒提取的10個常見問題

10個常見問題

一.時間控制問題

裂解時間太長,加入溶液P2後裂解時間不應超過5 分鐘;吸附時間不夠;溶解時間不夠都會導致質粒DNA提取實驗失敗。

二.大腸桿菌老化

建議塗布平板培養後,重新挑選新菌落進行液體培養。

三.質粒拷貝數低

由於使用低拷貝數載體引起的質粒DNA 提取量低,可更換具體相同功能的高拷貝數載體。

四.溶液使用不當

溶液P2、P3 在溫度較低時可能出現渾濁,應置於37℃保溫片刻直至溶解為清亮的溶液,才能使用。

五.吸附柱過載

不同產品中吸附柱吸附能力不同,如果需要提取的質粒量很大,請分多次提取。若用富集培養基,例如TB 或者 ×YT 菌液體積必須減少;若質粒或宿主菌是非常高的拷貝數或生長率,則需調整LB 培養液體積。

六.質粒未全部溶解

洗脫溶解質粒時,可適當加溫或延長溶解時間。

七.乙醇殘留

漂洗液洗滌後應離心儘量去除殘留液體,樹脂型試劑盒漂洗後應晾乾樹脂,再加入洗脫緩衝液。

八.洗脫液加入位置不正確

洗脫液應加在硅膠膜中心部位以確保洗脫液會完全覆蓋硅膠膜的表面達到最大洗脫效率。

九.洗脫液不合適

DNA 只在低鹽溶液中才能被洗脫。洗脫效率取決於pH 值。最大洗脫效率在pH7.0~ 8.5 間。當用水洗脫時確保其 pH 值在此範圍內,如果pH 過低可能性導致洗脫量低。洗脫時將滅菌蒸餾水或洗脫緩衝液加暖至 60 ℃後使用有利於提高洗脫效率。

十.洗脫體積太小

洗脫體積對來回收率有一定影響。隨著洗脫體積的增大回收率增高,但產品濃度降低。為了得到較高的回收率可以增大洗脫體積

質粒資源共享平臺是蘇州研究院細胞生物科學應用大設施項目的重要組成部分,主要通過募集獲取質粒資源,為廣大高校、科研院所以及醫療機構的科學工作者提供科研性資源的存儲、交流與共享的服務性平臺。從2019年8月正式開始籌備,截止目前,我們已經與超過30家高校及企業實驗室建立聯繫,保藏入庫的質粒數量已經超過3萬,並對部分實驗室提供了質粒諮詢和分發服務。


​質粒提取的10個常見問題


質粒資源共享平臺以完善的資源收集與保藏制度、強大的數據庫管理系統和專業科學的分發流程,確保質粒資源庫的高效有序運行,打造高水平的資源共享平臺,滿足實驗室在質粒資源上的需求。



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