2019-nCoV屬於冠狀病毒β屬，基因組為線性的單股正鏈RNA，是已知可感染人類的第7種冠狀病毒。然而，臨床上並不是所有2019-nCoV感染者都能通過常規標本測出2019-nCoV核酸，目前多地多家臨床機構已出現2019-nCoV核酸檢測假陰性情況，從而導致核酸檢測結果與臨床症狀、影像學檢查不相符。這其中涉及到樣本採集與存放，病毒感染的部位，RNA提取方法，核酸檢測試劑盒質量問題等多方面因素，給2019-nCoV感染診斷及防疫防控帶來巨大的影響。
《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》已經將抗體檢測結果列入到確診病例標準，並指出抗體檢測可以作為疾病診療動態檢測的重要指標。
疑似病例同時具備以下病原學或血清學證據之一者：
- 實時熒光RT-PCR檢測新型冠狀病毒核酸陽性；
- 病毒基因測序，與已知的新型冠狀病毒高度同源；
- 血清新型冠狀病毒特異性IgM抗體和IgG抗體陽性；
- 血清新型冠狀病毒特異性IgG抗體由陰性轉為陽性或恢復期較急性期4倍及以上升高。
病毒感染機體後，免疫系統對病毒進行免疫防禦併產生特異性抗體。其中特異性IgM抗體是機體感染後早期產生的抗體，可提示現行感染或新近感染。IgG抗體是再次免疫應答產生的主要抗體，提示病情進入恢復期或存在既往感染。
因此，免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）和免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗體聯合檢測不僅可以對感染性疾病進行早期診斷，而且有助於對機體感染階段的評估。
抗體檢測假陰性及假陽性結果分析
假陽性和假陰性結果會影響臨床診斷。為提高2019-nCoV抗體檢測的準確性，有必要對可能出現的及原因進行深入分析。
一、抗體檢測假陰性
1、防腐劑和抗凝劑：採用防腐劑疊氮化鈉、抗凝劑EDTA等處理標本，會抑制辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）的活性，造成ELISA假陰性。
2、標本保存不當：當標本在冰箱中保存過久時，血清中IgG聚合成多聚體，且抗體免疫活性減弱。
3、實驗員操作失誤或試劑盒保存不當：試劑使用前未平衡至室溫，試劑用量不足，溫育時間或溫度不足；試劑未按規定保存，受到汙染或失效等。
4、層析過快：抗原抗體複合物尚未與檢測線上的抗體結合，就越出檢測線，造成GICA假陰性。
二、抗體檢測假陽性
1、溶血或紅細胞標本：紅細胞的細胞內液中各種酶可與底物發生非特異性反應，且血紅蛋白中亞鐵血紅素與HRP活性類似，可催化底物，造成ELISA檢測假陽性；檢測區堆積形成顏色較淺的非特異性條帶，干擾目視法判定膠體金試紙結果。
2、纖維蛋白的影響：由於標本凝集不全或離心轉速過低、時間太短，血清中的纖維蛋白未完全析出，形成的塊狀或絮狀物堵塞洗板機頭。
3、細菌汙染標本：菌體內可能含有內源性HRP，造成ELISA假陽性結果；此外，疏水性的菌體碎片與金標粒子或捕捉抗體發生結合，影響GICA判讀。
4、患者自身原因：體內存在自身抗體、嗜異性抗體等，如患有某些基礎疾病或免疫功能異常，或長期服用某種藥物，可產生異常蛋白抗體或特殊物質，如類風溼因子、甲胎蛋白、補體等，具有一定吸附作用，造成抗體檢測假陽性。
核酸與抗體聯合檢測結果解讀
核酸與抗體聯合檢測可提高檢測效率，當聯合檢測結果出現以下情況時，需要綜合分析判斷進行結果的解讀。
一、核酸檢測陽性時，抗體檢測出現陰性或陽性結果
（1）核酸陽性，IgM和IgG均為陰性
患者可能處於2019-nCoV感染“窗口期”：“窗口期”是指從人體感染病毒後到外周血中能夠檢測出病毒抗體的這段時間，一般為２周。這段時間內，無法檢測血液中的病毒抗體，因此，IgM和IgG均為陰性。此時處於感染早期，病毒不斷複製，核酸載量呈指數遞增，達到核酸檢測下限，核酸檢測呈陽性。核酸檢測較血清抗體檢測的優勢在於縮短了感染檢出窗口期，可及早發現感染者。
（2）核酸陽性，IgM陽性、IgG陰性
患者可能處於2019-nCoV感染早期，機體免疫應答最早產生抗體IgM，暫未產生IgG或IgG含量未達到診斷試劑的檢測下限。
（3）核酸陽性，IgM陰性、IgG陽性
患者可能處於2019-nCoV感染中晚期或復發感染。在病毒剛入侵人體之時，免疫系統首先會產生臨時性抗體IgM，大約在1個月後達到峰值，隨時間的推移，侵入人體的病毒逐漸被IgM中和，IgM逐漸減少，直至低於檢測下限；同時，人體的免疫系統會產生持久性抗體IgG，在感染中晚期，IgG為機體免疫的主力軍，濃度高，能夠被檢測到。恢復期IgG抗體較急性期增加4倍及以上時，可診斷為復發感染。
（4）核酸陽性，IgM陽性、IgG陽性
患者處於感染活躍期，但人體已經對2019-nCov產生了一定的免疫能力（持久性抗體IgG已產生）。
2、核酸檢測陰性時，抗體檢測出現陰性或陽性結果
（1）核酸陰性，IgM陽性、IgG陰性
IgM陽性提示極大可能處於2019-nCoV感染急性期，此時需考慮核酸檢測結果存疑。出現核酸檢測假陰性的原因及應對建議主要有以下幾方面：標本質量差：採集上呼吸道的口、鼻咽拭子等部位標本時，推薦採集鼻咽拭子進行病毒核酸檢測，為了提高檢測陽性率，建議採集同一患者多部位標本（口咽拭子、鼻咽拭子、鼻腔拭子等）合併檢測；對於有消化道症狀的疑似患者，可同時採集糞便或肛拭子進行檢測。
標本採集保存不當：沒有正確保存、運輸和處理標本。推薦4°C運送標本（因RNA易降解）。技術本身原因：如病毒變異、PCR抑制等。由於2019-nCoV為單股正鏈RNA病毒，分子量大，具有易變異的特性，傳播過程中可能會產生核酸序列的變異，若處於核酸擴增的引物結合區，就會出現假陰性結果。建議針對多個核酸區域進行擴增，可有效避免核酸變異對檢測結果的影響。因此，當核酸檢測結果為陰性時，只可報告本次檢測結果陰性，不可排除2019-nCoV感染，需多次重複確認。患者有其他疾病，已發現類風溼因子引起IgM弱陽性或陽性的病例。
（2）核酸陰性，IgM陰性、IgG陽性
提示患者可能既往感染2019-nCoV，但已恢復或體內病毒被清除，免疫應答產生的IgG維持時間長，仍存在於血液中被檢測到。
（3）核酸陰性，IgM弱陽性、IgG陰性
提示患者初次感染載量極低的2019-nCoV並處於早期，病毒載量低於核酸檢測下限，機體產生少量IgM抗體，而尚未產生IgG；或者由於患者自身類風溼因子陽性等引起的IgM假陽性。
（4）核酸陰性，IgM陽性、IgG陽性
患者近期曾感染2019-nCoV並處於恢復期，體內病毒被清除，IgM尚未減低至檢測下限；或核酸檢測結果假陰性，患者處於感染活躍期。
【參考文獻】
1、新型冠狀病毒血清特異性抗體檢測技術應用探討，北京協和醫院檢驗科
2、IgM和IgG抗體聯合檢測在新冠病毒感染中的診斷價值，中華檢驗醫學雜誌
3、《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》
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