感染性疾病的免疫学检查

感染性疾病的免疫学检查

感染性疾病的免疫学检查
感染性疾病的免疫学检查

病原体侵入机体引起的疾病称为感染性疾病,作为抗原存在血液、体液和组织中,刺激机体的免疫应答,产生特异性抗体或某种化学物质升高或降低。感染性疾病的免疫学检查就是通过检测特异性抗原或抗体,来确定患者是否感染某种特定病原体。免疫学检验基本技术包括:沉淀反应、凝集反应、酶免疫技术、放射免疫技术、荧光免疫技术、发光免疫技术、胶体金免疫技术、流式细胞术。沉淀素试验、凝集试验、补体结合试验等操作繁复、工作量大、灵敏度和专属性差。标记抗体技术的应用,使免疫诊断方法的特异性、敏感性都有所提高,并具有简单、快速的特点。主要免疫技术介绍如下:

感染性疾病的免疫学检查

①免疫荧光显微术

用荧光色素代替染色液标记抗体或抗原,与病原微生物的抗原或抗体结合后,用荧光显微镜检查荧光素标记的显微检查技术。用荧光标记抗体可直接检测临床标本中的微生物抗原,如甲型流感病毒、副流感 1~3 型病毒、呼吸道合胞病毒等,敏感度可达 96%,特异性达 98%。用荧光素标记的单克隆抗体可用于沙眼衣原体、嗜肺军团菌和百日咳杆菌的诊断,但本法在病毒感染的诊断限于检测含病毒的细胞标本,不适用于血清或粪便等标本。用间接荧光法可测定军团病、卡氏肺孢菌、锥虫病、血吸虫病等寄生虫病的诊断。

②酶免疫技术

是用酶作标记物和指示剂标记抗体检测抗原或抗体的综合技术。可用于测定多种病毒感染病人血清中的 IgM抗体,如巨细胞病毒、EB 病毒、甲肝及乙肝病毒、HIV 病毒、诺瓦克病毒及某些立克次体感染等。用酶免疫法检测宫颈分泌物中沙眼衣原体,脑脊液、血清、尿液中 B 组溶血性链球菌,尿、血清及尸检标本中嗜肺军团菌,脑脊液中脑膜炎奈瑟球菌 A 抗原以及鼠疫病人血清中鼠疫杆菌抗原的检测等。

③单克隆抗体的应用

单克隆抗体纯度高,供应量不受限制,化学性质稳定,重复性好,应用单克隆抗体可以鉴别病原生物的种、型和亚型,特异性强,不会发生交叉反应。荧光标记单克隆抗体可用于沙眼衣原体、嗜肺军团菌、梅毒螺旋体等抗原检测,以及肝炎病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、单疱病毒、腺病毒、肠道病毒、HIV 等多种病毒抗原的检测,此外还可用于检测体液中多种寄生虫抗原,如疟原虫、锥虫、绦虫和血吸虫等。

1)细菌感染的免疫学检查

(1)结核感染的的免疫学检查

①结核杆菌抗体采用结核分枝杆菌特异性外膜抗原,利用斑点免疫金渗滤试验原理,检测人血清中结核分枝杆菌抗体。本实验结果主要用于结核病的辅助诊断。

②结核菌素试验用于诊断结核病,因其操作简便、成本低廉,至今仍广泛使用,但其抗原成分复杂,与非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria,NTM)和BCG成分交叉,易致“假阳性”,因此,在普遍接种BCG地区如我国,对结核菌素阳性结果的解释应当慎重;同时对免疫功能受损的患者如人免疫缺陷病毒(HIV)感染者和重症疾病患者,缺乏足够的灵敏度,对儿童TB诊断可作为比较重要的依据。

③γ-干扰素释放试验(IGRAs)

结核分枝杆菌(MTB)感染后,患者的外周血中会产生特异性活化的效应T细胞,这些效应T细胞经MTB特异抗原(ESAT-6、CFP-10和(或)TB7.7)刺激后,可分泌γ干扰素(γ-IFN),通过体外检测γ-IFN分泌来判断机体是否处于MTB感染状态。目前,IGRAs商品化试剂盒主要以T-SPOT.TB试剂盒和QuantiFER ON-TBGold In Tube试剂盒(QFT)为代表,前者的原理为采用酶联免疫斑点技术,以MTB特异性抗原ESAT-6和CFP-10刺激外周血分离的单个核细胞,检测分泌γ-IFN的T淋巴细胞数量;后者的原理为采用酶联免疫吸附试验,以ESAT-6、CFP-10、TB7.7抗原刺激全血中致敏T细胞,测定全血中特异性T细胞所释放的γ-IFN水平。由于ESAT-6、CFP-10、TB7.7抗原只存在于结核分枝杆菌复合群中,而在BCG菌株和绝大部分环境分枝杆菌(除外堪萨斯分枝杆菌、海水分枝杆菌和苏加分枝杆菌)中缺乏,因此,IGRAs诊断MTB感染的特异度较高。但IGRAs阳性结果仅能提示结核感染,不能有效区分潜伏结核感染(LTBI)和活动性结核病(ATB),不能准确预测LTBI发生ATB的风险。有文献报道对于潜伏性结核、早期结核以及活动性结核的检测,QFT比使用了Xtend延长剂的T-Spot具有更好的灵敏度,与使用了Xtend延长剂的T-Spot相比,QFT更适用于潜伏性结核及早期结核的检测。

(2)布鲁菌感染的免疫学检查

即检测机体对菌体细胞膜上的光滑脂多糖(smooth-lipopolysaccharide,S-LPS)产生的抗体。由于产生抗体种类和效价随病程的变化而不同,且流行区背景效价的存在,抗体检测界值的确定是难题,难以顾全灵敏度和特异度。需要对所在地区的人群行背景效价的调查,建立正常区间。由于假阳性和假阴性的存在,建议同时采用两种以上血清学检测方法。

国际上应用较广的血清学方法主要有虎红平板凝集试验、血清凝集试验和ELISA,具体如下:

①虎红平板凝集试验(rose bengal plate agglutination test,RBPT):

方便快捷,可在5~10 min内获得结果,呈现为阳性或阴性,推荐用作快速筛查试验。该方法基于菌体细胞膜上的光滑脂多糖(S-LPS),在非暴露人群中敏感度高,假阳性率低。但流行区高背景抗体效价会影响其诊断价值,且由于与其他革兰阴性菌的交叉反应,可出现假阳性结果。布鲁杆菌慢性感染和有并发症的患者可能出现较高的假阴性率。阳性结果须由其他血清学试验确认。

②血清凝集试验(serum agglutination test,SAT):

检测所有针对布鲁杆菌S-LPS抗原的凝集性抗体(包括IgM、IgA、IgG)。对产生症状的急性感染患者更加敏感,WHO建议判断标准定为1∶160。对于流行区患者,由于高背景抗体效价,建议定为1∶320。然而假阴性也可能出现在某些病程(如起病的超早期或慢性期),由于抗原表位的不同,犬布鲁杆菌可以表现为SAT阴性。因此阴性并不能完全排除诊断。两次抗体效价升高4倍方可作为确诊标准。

③ELISA:

检测迅速,敏感度、特异度较高,可以针对性地检测不同抗体,包括非凝集性抗体。当其他测试都阴性时尤其推荐使用,可用于疗效监测和急慢性、局灶、并发症感染的检测。

此外,国家疾病预防控制中心研发的布鲁菌体外检测试剂盒,正式获批拿到临床文号,试剂有布鲁菌病试管凝集试剂、虎红玻片凝集试剂和胶体金快速凝集试剂3种。

(3)沙门菌感染的免疫学检查

①肥达反应(WR)肥达(Widal)氏反应用甲醛溶液灭活的伤寒杆菌的H(鞭毛)和O(菌体)、各型副伤寒杆菌制成菌液,通过凝集试验原理检测患者血清中相应抗体效价的试验。以能清晰见到凝集反应1+的最高稀释倍数为凝集效价。抗伤寒沙门菌O凝集价>1:80,H凝集价>1:160,抗副伤寒沙门菌>1:80才有诊断价值(判断为该项阳性)。真正伤寒病人,O凝集素较H凝集素出现为早,存在于血清内时期较短;H凝集素产生较慢,但效价较高,存在时间较长。 过去曾接种伤寒或患过伤寒病,新近又感染流感、传肝等病时,可产生高度的H凝集素及较低的O凝集素,此种反应称为回忆反应。 另外,伤寒杆菌尚有Vi(胞膜)抗原,它存在于O抗原最表层,常可遮蔽O抗原对抗体的作用,结果病程初期,可以不出现O凝集素,而仅有H凝集素。

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②沙门菌血清学分型鉴定

生化反应典型,尤其怀疑是伤寒沙门菌,用可疑菌株与沙门菌多价血清(A-F)进行凝集,若出现肉眼可见的凝集块或颗粒,则提示被检菌株可能属于A-F 6个O群范围之内。

(4)志贺菌感染的免疫学检查

志贺菌血清学分型鉴定:用可疑菌株与志贺菌多价血清(四种)进行凝集,若出现肉眼可见的凝集块或颗粒,则提示被检菌株可能属于这四种志贺属范围之内。

(5)致病性大肠杆菌感染的免疫学检查

致病性大肠菌血清学分型鉴定大肠埃希菌是人肠道正常菌群,但其中有些菌株能引起轻微腹泻,并能引起致死性并发症如溶血性尿毒综合征,所以实验室对肠道致病性大肠埃希菌检出很重要。适用于已知致病性大肠埃希菌菌株的分型鉴定,用已知的致病性大肠埃希菌诊断血清,在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合,若出现肉眼可见的凝集块或颗粒,即该菌为此致病性大肠埃希菌。用可疑菌株与致病性大肠埃希菌多价血清(OK1、OK2、OK3)进行凝集,若出现肉眼可见的凝集块或颗粒,则提示被检菌株可能属于此相应血清型的致病性大肠埃希菌(注意区分致病性大肠埃希菌的自凝现象)。 肠出血性大肠杆菌O157:H7是血便中分离到的最常见的、属于高危传染性的病原菌,实验室对肠出血性大肠杆菌O157:H7检出很重要。

(6)霍乱弧菌感染的免疫学检查

霍乱是O1 群和O139群血清群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,以发病急、传播快、波及范围广能引起大流行为特征的国际传染病之一,是甲类传染病。霍乱弧菌血清学分型鉴定适用于已知霍乱弧菌属菌株的分型鉴定。 用已知的霍乱弧菌诊断血清(O1 群和O139群),在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合,若出现肉眼可见的凝集块或颗粒,则提示被检菌株可能属于这两个群范围之内。

(7)立克次体感染免疫学检查

立克次体大多为细胞内寄生菌,很大部分不使人致病,对人类有致病作用的约有20余种。立克次体的自然宿主是嗜血节肢动物,人类罹患疾病多因为节肢动物叮咬。临床上多采用外—斐氏反应(Weil-Felix_reaction)进行血清血诊断。变型杆菌菌株OX2、OX19和OXK与立克次体的脂多糖有交叉抗原,把它与病人血清进行非特异性凝集反应,通常,发病后2~3周,可观察到阳性结果,本试验系非特异性反应,因变形杆菌引起的其它疾病或通过人体的机会较多,故凝集价不高的假阳性反应时有发现。另外,也可用ELISA或放免法,检测人体特异性IgM抗体,窗口期可提早为7~10天。

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(8)链球菌感染的免疫学检查

①抗链球菌溶血素O(ASO)测定

链球菌溶血素O是由A族β-溶血性链球菌产生的几种有毒的免疫性胞外酶之一。抗链球菌溶血素O效价升高通常是最近受到A族β-溶血性链球菌感染的一个指征,因此已成为诊断和治疗急性风湿热和急性肾小球性肾炎的常规指标。在最近受链球菌感染者或其后遗症患者中,大约80~85%的人显示抗链球菌溶血素O效价升高。当患者表现出急性风湿热症状时,其抗链球菌溶血素O效价可能已降低,因此不能因抗链球菌溶血素O的阴性结果而排除先前发生过链球菌感染的可能性。此外,因皮肤感染而使抗链球菌溶血素O效价升高是不常见的。检测另一种链球菌抗原(如DNase B)的抗体可能有所帮助。

②肺炎链球菌感染的免疫学检查

肺炎链球菌抗原检测试剂盒(胶体金法),是一种体外快速免疫层析(ICT)试验,用于检测肺炎病人尿液和脑膜炎病人脑脊液(CSF)中的肺炎链球菌感染,是一种简便快速的诊断方法。

(9)军团菌感染的免疫学检查

军团菌尿抗原测定是定性检测尿液标本中嗜肺军团菌1血清型抗原,是一种体外定性免疫层析检测实验,可用于人尿液中嗜肺军团菌抗原的的快速检测。实验结果可用于辅助诊断嗜肺军团菌感染和监测嗜肺军团菌感染的治疗效果。

尿抗原检测的灵敏度70~100%,特异性100%。灵敏度取决于标本采集的时间和质量以及实验室检测技术水平。

(10)幽门螺杆菌感染免疫学检查

金标法尿素酶快速检测试纸(剂)检测抗原或抗体。抗原标本为粪便,抗体标本为血液、血清、指尖血。特点是方便、快捷、8分钟可出结果,且不受条件的限制。为目前主流检测方法。慢性胃炎的血清幽门螺杆菌抗体阳性率为80%~87%,浅表性胃炎和萎缩性胃炎检出率无差异;胃溃疡和十二指肠球部溃疡的抗幽门螺杆菌抗体检出率分别为70%~80%和59%~96%。

(11) 梅毒螺旋体感染免疫学检查

由于梅毒螺旋体侵入机体可产生非特异的反应素和抗密螺旋体抗体等两种抗体,因而血清测定方法可根据所使用的抗原分为非密螺旋体抗原血清学试验和密螺旋体抗原血清学试验两大类,前者以心磷脂为抗原,检测血清中抗心磷脂抗体,也就是所谓的反应素,主要包括VDRL(venereal disease research laboratory test)、RPR(rapid plasma regain circle card test)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),特异性较差,可在多种疾病中出现假阳性的结果,例如麻风、结核、红斑狼疮、类风湿关节炎、猩红热等,据报道上述实验在没有梅毒感染史的正常人群中阳性率达0.1%;此外,由于感染梅毒螺旋体后,机体血循环中心磷脂抗体的出现要晚于特异性的抗梅毒螺旋体抗体,并且三期梅毒这类抗体还有可能转阴。基于以上原因,通常不推荐采用非密螺旋体抗原血清学试验作为梅毒的筛查试验,可用于梅毒疾病活动性的判定、疗效检测等。以密螺旋体或其成分为抗原检测血清中特异的抗密螺旋体抗体,目前较为常用的有荧光密螺旋体抗体吸收试验(fluoresent treponemal antibody-absorption test, FTA-ABS)、梅毒螺旋体血球凝集试验(treponema pallidum hemagglutination assay, TPHA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination assay, TPPA)。酶联免疫吸附试验、化学发光免疫分析和蛋白印迹技术是目前实验室常用梅毒的检测方法。

(12)降钙素原(PCT)

检测降钙素原(PCT)是血清降钙素(CT)的前肽物质。健康人血液中的PCT浓度小于0.05ng/ml。细菌感染或脓毒血症状态下,机体各个组织、多种细胞类型均可产生PCT,并释放进入血液循环系统。PCT在细菌感染,特别是脓毒血症方面的敏感性和特异性均高达95%以上,尤其是严重脓毒血症和脓毒血症性休克,诊断特异性高达100% 。目前PCT诊断脓毒症的界值水平为>0.5ng/ml。PCT<0.05ng/ml的患者患高风险细菌性感染的可能性非常小,PCT浓度从0.5ng/ml上升超过2ng/ml时,严重细菌感染或脓毒症的发生率增高,高水平PCT表明全身炎症反应非常严重,死亡风险很高,应立即开始抗生素及针对性治疗。PCT在全身细菌感染患者血浆中,浓度的升高比CRP及其它炎性因子出现都早,2小时即可检测到,6小时急剧上升,8-24小时维持高水平。病毒性疾病时PCT不增高或仅轻度增高,PCT也可作为细菌感染治疗效果及预后的判断指标。PCT常用检测方法有放射免疫分析法、免疫荧光法、化学发光法、酶联免疫法等。

(13)C反应蛋白 (CRP)检测

CRP是一种能和肺炎链球菌的荚膜C多糖结合,由5个相同的亚单位(23KD)以非共价键聚集形成的环状五聚体蛋白,正常人血清中CRP含量极微。CRP是急性时相反应蛋白之一,在感染发生后6~8h开始升高,24~48h达到高峰,比正常值高几百倍,升高幅度与感染的程度呈正相关。病毒感染时,CRP不增高(除了一些严重侵袭导致组织损伤的病毒如腺病毒、疱疹病毒等)。CRP目前对全身感染有一定的敏感性,在针对局部细微感染其作用是受限制的。CRP常用检测方法为免疫比浊法、标记免疫测定法、POCT。

2)真菌感染的免疫学检查

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(1)真菌1,3-b-D-葡聚糖检验(G试验)

真菌细胞壁中1,3-b-D-葡聚糖占细胞壁成分的50%。真菌进入体内血液或组织后被机体的吞噬细胞所吞噬,真菌被消化,细胞壁被破坏,此时1,3-b-D-葡聚糖就释放到血液和体液中,通过检测血液或体液中的1,3-b-D-葡聚糖就可以诊断侵袭性真菌感染及侵袭性真菌病。而在真菌定植的情况下,真菌不接触机体吞噬细胞故不能释放出1,3-b-D-葡聚糖。因此,血清G试验就成为区别定植和感染的重要依据。G试验属于生化反应,干扰G试验的因素很多。首先,严重黄疸、严重溶血和脂血标都会引起试验失败。其次,还有许多因素可造成G试验出现假阳性或假阴性。

G试验检测的特点:

1可检测除隐球菌和接合菌外的多种真菌感染,属于一种广范围真菌病的筛查试验。

2.G试验检测一般先于临床症状平均四天,平均早于发热5 d,早于呼吸道症状平均10.7 d,。故可作为侵袭性真菌病早期诊断方法之一。

3.对于念珠菌血症, G试验检测是首选检查方法 。

4.检测快速,可在1-2小时得出检测结果。

5.G试验最大的缺点是假阳性率较高。

(2)曲霉感染的免疫学检查

GM试验是检测曲霉菌细胞壁半乳甘露聚糖(Galactomannan, GM)的试验。曲霉侵入机体后,菌丝在组织中生长,其薄弱的菌丝顶端可释放出半乳甘露糖(GM)到血液和体液中,因此,通过检测血液和体液中的GM,便可诊断侵袭性曲霉菌感染或侵袭性曲霉病。GM比侵袭性曲霉病临床症状平均早5-8天,比高分辨CT扫描平均早7.2天,所以GM试验可用于曲霉菌感染的早期诊断的筛查指标。同时GM释放量与菌量成正比,GM水平的高低可以反映感染程度。同时由于GM在血清中存在时间较短,所以也可以作为疗效评价指标。其诊断的灵敏度和特异性均高达90%左右。GM试验的假阳性率约为10%-15%,引起假阳性的主要原因 是抗菌药物应用、使用了半合成青霉素、与其他细菌或真菌成分有交叉反应,例如马内菲蓝状菌(多种青霉、 拟青霉)、深红酵母、新生隐球菌 、头地霉 、链格孢等。

(3)念珠菌感染的免疫学检查

念珠菌甘露聚糖抗原检测(mannan,M试验)是检测念珠菌细胞壁甘露聚糖的试验。甘露聚糖(Mannan,Mn)是念珠菌细胞壁特有的多糖抗原标记物,也是念珠菌细胞壁的主要成分。感染初期可以在患者血液中检测到,Mn试验通过定量测定血液中Mn的浓度实现侵袭性念珠菌感染的检测。 在75%念珠菌血症患者中,M抗原及M抗体检测阳性早于血培养阳性,其中M抗原早6天,M抗体早7天;对于肝脾念珠菌病患者,M抗原及抗M抗体检测阳性出现时间,比肝及脾的影像学变化平均早18天。是M抗原检测的敏感度与念珠菌种类有关,其中对白念珠菌感染诊断敏感度最高,对光滑念珠菌感染和热带念珠菌感染诊断敏感度次之,而对近平滑念珠菌和克柔念珠菌感染诊断敏感度最差。由于M抗原在血液中很快就被清除或降解,所以,有作者建议对于高危患者每周检测2-3次减少漏诊。

(4)隐球菌感染的免疫学检查

隐球菌抗原(CrAg)检测具有很高的敏感性及特异性,可在症状出现之前检测到。目前常用的检测方法有3种,分别是乳胶凝集法(LA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和侧向免疫层析法(LFA)。三种方法均利于患者病情的早期诊断,监测隐球菌抗原滴度的下降,可作为抗隐球菌疗法有效的指示。据文献报道以培养为金标准,LA在血标本和脑脊液的敏感性分别为83~97%和93~100%,特异性分别为93~100%和93~98%。ELISA法敏感度高于LA法,其检测血标本的敏感性和特异性分别为94%和96%,检测脑脊液的敏感性和特异性分别为100%和98%,但操作繁琐,需要配置额外设施,对新生隐球菌(血清型D)和格特隐球菌(血清型C)检测敏感性低。LA具有检测需要时间短,操作方便,其局限性为结果判读受人为因素影响较大,需要对标本进行前处理,对格特隐球菌(血清型C)敏感性低。ELISA法和LA法试验的假阳性率为0.0%~0.4%。LFA法是IMMY 公司继乳胶凝集法后新研发的试剂盒,其在常温状态下性质稳定,操作简便且耗时短(1Omin),对结果的判定简单又准确,标本不需前处理,敏感性高于LA法和ELISA法。对所有血清型新生隐球菌和格特隐球菌均有很高的敏感性。有文献报道LFA对隐球菌病的诊断敏感性和特异性可达到100%,特别是检测低浓度的荚膜抗原方面。应用LFA检测指尖血、血清、血浆和脑脊液中荚膜多糖抗原,其结果一致性为100%。

(5)组织胞浆菌感染的免疫学检查

对于播散性组织胞浆菌病和急性肺组织胞浆病,检测血或尿中组织胞浆菌抗原是一种快速、敏感的方法,但对慢性肺组织浆菌病不敏感。对于合并感染播散性组织胞浆菌病的AIDS患者,应用一种新的定量方法,可在尿液100%检测到抗原,血清检测阳性率为92%。 检测肺泡灌洗液中的抗原对诊断肺组织胞浆病可能是一种有用方法。组织胞浆菌引起的脑膜炎,真菌涂片通常为阴性,真菌培养也很少出现阳性,然而脑脊液组织胞浆菌抗原或抗体检测,阳性率达70%。

(6)球孢子菌感染的免疫学检查

通常球孢子菌病的诊断是结合阳性的球孢子菌血清学试验和临床症状。既往球孢子菌感染患者无疾病活动时,通常血清学试验阴性。有一种商业化的球孢子菌特异性抗原检测试剂盒,它能从活动性球孢子菌病患者的尿液、血清和其它体液标本中检测出抗原,对胸外播散性球孢子菌病的诊断有重要价值,该方法检测脑脊液中的球孢子菌抗原有很高的灵敏度和特异性。

3)寄生虫感染的免疫学检查

感染性疾病的免疫学检查

(1)弓形虫感染免疫学检查

弓形虫抗体测定常用化学发光法和酶联免疫吸附法,检测血液中IgM、IgG抗体及IgG抗体亲和力检测。IgM抗体一般在感染1周后出现,4~8周逐渐消失,是近期感染的指标,如果弓形虫抗体IgM阳性,应当进行类风湿因子吸收试验后再测,以排除假阳性。IgG抗体一般在感染2周后出现,可持续存在很多年,是既往感染的指标。近期感染IgG抗体亲和力低,既往感染IgG抗体亲和力高,可区别近期和既往感染。抗体滴度过低的样本不适合进行抗体亲和力检测,高滴度样本应适当稀释后再进行亲和力检测。

(2)疟原虫感染免疫学检查

疟原虫抗原快速检测胶体金法:使用的是薄膜免疫层析技术,该技术用单克隆抗体检测静脉血和末梢血中的恶性疟原虫抗原和间日疟原虫抗原,T1阳性:恶性疟原虫(P.f.),T2阳性:间日疟原虫(P.v.), T1+T2阳性:可能存在恶性疟原虫和间日疟原虫的混合感染对恶性疟原虫的最低检测限是1001~1500个寄生虫/微升,对间日疟原虫的最低检测限是5001~5500个寄生虫/微升。

(3)血吸虫感染免疫学检查

检测抗血吸虫抗体方法有

(1)环卵沉淀反应:患者阳性率为97.3%,但与肺吸虫和华支睾吸虫感染者有交叉反应,约占1%~6%。本试验可作为疗效观测指标。

(2)ELISA法:敏感性高,患者阳性率可达100%,但有1%~2%假阳性。

(3)其它试验,均测特异性抗体:乳胶凝集试验、间接红细胞凝集试验、免疫印迹技术。

(4)其它寄生虫感染免疫检测

①猪带绦虫病:应用单克隆抗体酶联免疫吸附试验和单克隆抗体胶乳凝集试验,检测血清或脑脊液中的循环抗原,脑脊液检测阳性率高于血清。

②溶组织内阿米巴感染检测:最常用的是特异性抗体检测,应用重组抗原检测抗体,其敏感性和特异性均在90%以上,阿米巴肝脓肿患者中血清抗体阳性率可达95%以上。该方法可有效检测无症状带包囊者,也可用于区别溶组织内阿米巴和迪斯帕内阿米巴,前者可诱导人体产生特异性抗体,后者不能。

③棘球蚴病免疫检测:检测抗体:常用的方法主要为间接血凝试验、酶联免疫、对流免疫电泳。血凝试验检出率80%左右。

④班氏丝虫感染免疫检测:单克隆抗体Og4C3和AD12.1用于检测微丝蚴患者血液,敏感性高达94~100%。

⑤旋毛虫检测:一般用丝虫抗原来检测抗体。

4)病毒感染的免疫学检查

感染性疾病的免疫学检查

(1)甲型肝炎病毒(HAV)免疫学检查

检测血清或血浆中的HAV抗体是诊断HAV感染的主要手段,其特异性指标包括抗HAVIgG、抗HAVIgM以及抗HAV总抗体测定。常用方法有化学发光法和酶联免疫吸附试验,HAV感染后早期产生IgM型抗体,在临床症状刚出现时,IgM即开始升高,第二周达高峰,一般可持续8周。HAV IgM的出现与临床症状及生化指标异常的时间相一致,是感染早期较好的检测指标]。HAV IgG抗体出现稍晚,感染后3~12周出现,6个月后达高峰,可终生存在,作为既往感染的标志。

(2)乙型肝炎病毒(HBV)免疫学检查

HBV的免疫检测指标主要为以下项目,检测方法常见为化学发光法、酶联免疫吸附试验、免疫渗滤层析和表面抗原中和试验。

1.表面抗原(HbsAg):HBV感染后,最早出现于血液循环中的是HBV抗原,表面抗原是乙肝病毒的蛋白质外壳,人体感染乙肝后2-6月,可在血液中检出,是早期感染的诊断指标之一。在恢复期HbsAg水平会逐步降低乃至消失。但是有少部分人HBsAg可持续阳性,可能是编码HbsAg的基因整合到肝细胞DNA内。当肝细胞新陈代谢时,HbsAg也被不断复制出来,可能这时病毒已被清除。另外,病毒变异也影响HbsAg合成,尽管表面抗原是阴性,但仍旧是HBV感染者。

2.表面抗体(HbsAb):表面抗体是一种保护性抗体。乙肝疫苗注射后,机体会出现该抗体;当抗体水平低于10mIU/ml时,可认为免疫接种失败。急性乙型肝炎患者在HbsAg消失后,也会出现该抗体。一般情况下,抗HBs和HBsAg不同时存在。若同时检出,可能机体处于表面抗原逐渐消失、表面抗体刚开始产生的交替阶段;或者,感染的病毒不止一种亚型,即产生的抗体不是针对同一种抗原的;或者,病毒已发生变异。

3.e抗原(HbeAg):一般表面抗原阳性,e抗原也阳性,它是病毒复制的一个指标,当表面抗原出现后,才有e抗原。e抗原阳性的血液传染性强。现在发现,e抗原阴性也不能认为没有病毒复制,因为,病毒发生了突变,使机体不能产生e抗原,人体内仍存在表面抗原或乙肝病毒核酸。若急性乙肝病人HBeAg持续阳性3个月以上,则有慢性化倾向。

4.e抗体(HbeAb):e抗体不是保护性抗体,它出现在e抗原之后。抗e阳性的血液也有传染性,但是强度低于e抗原阳性的血液。一般,e抗原和e抗体不同时出现。

5.核心抗体(抗HBc;抗HBc-IgM):临床上分总核心抗体和核心IgM抗体。前者是感染过乙肝病毒的标志,不是保护性抗体。后者是急性乙型肝炎的重要指标。在急性发作期抗体滴度可高达几万。随着急性乙肝的恢复,抗HBc IgM滴度会降低乃至消失。若持续高滴度,则表明病人有慢性化趋势。研究表明,在慢性活动性乙型肝炎血中,抗HBc IgM检出率及滴度亦较高,说明HBV在体内复制活跃,是传染性强的指标之一。

(3)丙型肝炎病毒(HCV)免疫学检查

HCV感染后,血液循环中最早出现的是病毒核酸,几乎同步出现HCV核心抗原,然后出现特异性抗体IgM和IgG。IgG可长时间高浓度存在血液中,不是中和性抗体,没有保护性,仅是感染的标志物,其检测方法有化学发光法、酶联免疫吸附试验、免疫渗滤层析和确认试验。HCV抗原抗体联合检测可有效缩短检测的窗口期,当结果为弱阳性时,可采用核酸检测进行结果确认。

(4)丁型肝炎病毒(HDV)免疫学检查

HDV只有在HBV的伴随下才能造成感染,实验室常用酶联免疫吸附试验检测抗-HDVIgM和抗-HDVIgG。

(5)戊型肝炎病毒(HEV)免疫学检查

戊型肝炎病毒抗体(Anti-HEV )测定包括IgG、IgM抗体,检验方法有化学发光法、酶联免疫法等。戊型肝炎病毒的抗体分为IgM、IgA和IgG。三种抗体出现和消失的次序依次为IgM、IgA、IgG;IgM在感染早期即可检出,在临床症状刚出现时,IgM即开始升高,第二周达高峰,1~2个月后滴度明显下降。HEV IgM的出现与临床症状及生化指标异常的时间相一致,是感染早期较好的检测指标;抗HEV-IgM阳性或抗HEV-IgG由阴转阳,或滴度4倍以上升高是急性戊型病毒性肝炎的血清学检测诊断标准,IgG为既往感染的指标。由于HEV感染有时会因为宿主无应答或应答水平低,临床上约有10%的患者测不出抗体,确诊依赖于HEV RNA扩增检测。

(6)风疹病毒感染免疫学检查

孕妇在孕期6个月内感染风疹病毒,病毒可通过胎盘侵犯胎儿(垂直传播),除引起流产、死产外,活产者大约29%表现为“先天性风疹综合征”,由于脐带血中可能含有源于母体的病毒特异性IgM抗体(胎盘渗漏),因此,最好在出生后5天内再对婴儿的后续样本进行检测,以证实脐带血样本病毒特异性IgM抗体的阳性结果。强烈推荐新生儿与母亲的血清样本平行测试,如果是胎儿的先天性感染,其IgM抗体水平(以及IgG抗体水平)会持续存在或呈上升趋势,反之,如果抗体来源于母体,则在在平行实验中婴儿的抗体水平会逐渐下降或消失。

由于孕妇的实验室检查不能可靠地鉴定胎儿患病的风险,不得将风疹病毒-IgM的检测结果单独作为终止妊娠的依据。

(7)人免疫缺陷病毒(HIV)感染免疫学检查

HIV感染后,血液中最早出现的是HIV核酸,然后是P24抗原,接着出现的是针对HIV相应蛋白的特异性抗体。血清学检测方法分为筛查和确认。筛查方法常用的有化学发光法、酶联免疫法、胶体金法等。确认试验包括免疫印迹试验、条带免疫试验及免疫荧光试验。艾滋病病毒抗原抗体联合检测血清或/和血浆中的抗HIV-1和抗HIV-2抗体和HIV P24抗原,是获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的筛查方法,可有效缩短检测的窗口期。如果为早期感染,可能抗原阳性,抗体阴性,应采用核酸检测确认。HIV抗体确认试验目前以免疫印迹试验最为常用。免疫印迹试剂有 HIV-1/2 混合型和单一型,一般先用 HIV-1/2 混合型试剂进行检测,无 HIV 抗体特异带出现,报告 HIV 抗体阴性;出现 HIV 抗体特异带,符合 HIV-1 抗体阳性判定标准,则报告 HIV-1 抗体阳性。如出现 HIV-2 型的特异性条带,需用 HIV-2 型免疫印迹试剂再做单一的 HIV-2 型抗体确认试验,呈阴性反应,报告 HIV-2 抗体阴性;呈阳性反应的则报告 HIV-2 抗体血清学阳性,如需鉴别应进行核酸序列分析。如果出现 HIV 抗体特异带,但带型不足以判定为阳性,则判为 HIV 抗体不确定。对 HIV 抗体不确定者应进行随访,必要时可做 HIV-1 P24 抗原或核酸测定,但检测结果只能作为辅助诊断依据,确认报告要依据血清学随访结果。

(8)巨细胞病毒感染免疫学检查

巨细胞病毒IgM/IgG抗体检测为化学发光法和酶联免疫法,血清学调查表明40%-100%成人有CMV抗体,其流行无季节性倾向。亚洲和非洲90%的人口受感染,其中大多数人在青少年时期即有抗体,说明感染年龄较早。多数人一生中都感染过CMV,但主要为无症状的亚临床感染。孕妇的原发或新的复发感染均可引起新生儿宫内或围产期感染,但原发感染对胎儿的危害比复发感染严重。当孕妇患有巨细胞活动感染时,病毒可通过胎盘进入胎儿体内引起先天性感染,先天性感染的胎儿多数可出现智力低下,视力受损,听力丧失等症状,特别是引起婴儿的巨细胞包涵体病,患儿可多个系统、多个器官受损。

(9)单纯疱疹病毒感染免疫学检查

单纯疱疹病毒(HSV)有两个血清型即单纯疱疹病毒l型(HSV-1)和单纯疱疹病毒2型(HSV-2),两型病毒核苷酸序列有50%同源性。HSV-l主要是通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触传播,十岁以前的儿童最易受到感染,有症状的感染主要是引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎等。HSV-2主要通过性传播,可引起生殖器疱疹,85%以上的生殖器疱疹是由HSV-2引起,HSV-1一般不引起生殖器的复发性感染,99%以上的复发性生殖器疱疹由HSV-2引起。实验室检测方法为化学发光法和酶联免疫法,检测单纯疱疹病毒Ⅰ型抗体IgG、IgM和单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体IgG、IgM。

(10)麻疹病毒感染免疫学检查

抗体测定包括IgG、IgM抗体,IgM抗体酶联免疫捕获法结果阳性,提示麻疹病毒急性或近期感染,对阳性和可疑结果建议1~2周后再次采样检测,动态观察抗体水平的变化。症状不典型的病人需根据血清麻疹抗体的检测或麻疹病毒的分离阳性做出诊断。

(11)EB病毒感染免疫学检查

EBV 是传染性单核细胞增多症的病原体。另外还发现 EBV 感染与淋巴瘤和鼻咽癌也有关。普通人群中具有较高的 EBV 病毒感染率。通常情况下,在病毒感染早期(潜伏期)免疫系统最早产生针对 EBV衣壳抗原( EBV-VCA )IgM抗体,该抗体滴度在具有明显临床症状时可达到峰值,并随疾病进程逐渐下降,但仍将持续阳性 4~8 周,因此检测抗 EBV-衣壳抗原的IgM 抗体,可以提示病毒感染早期。由于 EBV-VCA IgM 抗体在患者发病后出现早、消失快,因此在临床常被认为是传染性单核细胞增多症(IM)早期诊断中灵敏度与特异性高的诊断指标。对于异嗜性凝集试验阴性及临床表现不典型而疑诊的患者,EBV-VCA IgM 是早期、敏感、特异的临床诊断依据。胎盘中特异性IgM抗体的检测是诊断胎儿宫内感染的可靠依据。常用免疫方法为酶联免疫吸附法和化学发光法。

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