AD的兩個主要病理特徵是澱粉樣蛋白（Aβ）斑塊和高磷酸化tau蛋白誘導的神經原纖維纏結。近年來，越來越多的研究表明，包括miRNA在內的表觀遺傳因素通過調控基因表達、Aβ產生和tau磷酸化而參與AD發病過程。先前的研究發現，在小鼠中miR-369可通過靶向N鈣粘著蛋白的表達來促進大腦發育，且miR-369在神經元分化和遷移中也起一定作用為了證明miR-369在AD發病機理中的作用。本研究應用miR-369基因敲除的3xTg-AD小鼠，研究了miR-369的缺失對其認知功能和tau病理的影響，以及miR-369對Fyn和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶2（SRPK2）的調控作用。
miR-369敲除加劇了AD小鼠的認知障礙
miR-369KO/AD小鼠在Morris水迷宮（MWM）測試中的逃避潛伏期顯著增加，穿過目標平臺的數目顯著減少；在Barnes迷宮中，尋找目標的錯誤次數更多，耗費時間也更長，表明其學習能力顯著受損。
圖1 miR-369KO/AD小鼠的行為學表現
miR-369敲除促進AD小鼠的Tau蛋白過度磷酸化和Fyn和SRPK2的上調
miR-369KO/AD小鼠的大腦皮質、海馬、小腦和紋狀體中的成熟（功能性）miR-369表達完全喪失。儘管MAPT基因（編碼tau蛋白）和總tau蛋白表達均未改變，但其大腦皮層組織Ser214和Tyr18位點tau蛋白的磷酸化水平增加。此外，miR-369KO/AD小鼠腦中Fyn和SRPK2的水平均顯著增加。
圖2 miR-369KO/AD小鼠p-tau、Fyn和SRPK2表達
miR-369的恢復逆轉了miR-369KO/AD小鼠腦中Tau的過度磷酸化以及Fyn和SRPK2的上調
通過向miR-369KO/AD小鼠腦室內注射miR-369質粒，3個月後收集小鼠大腦皮層組織，實時定量PCR結果顯示其miR-369的表達明顯上調。注射miR-369後，大腦皮層Fyn和SRPK2蛋白的表達水平以及tau蛋白Ser214和Tyr18位點的磷酸化水平降低，總tau蛋白表達未見明顯變化。
miR-369靶向Fyn和SRPK2
基於TargetScan網站發現Fyn和SRPK2均可以作為miR-369的靶基因。因此，作者通過轉染報告基因構建體在293T細胞中進行了熒光素酶分析。結果表明，miR-369能夠靶向結合Fyn和SRPK2並抑制其表達水平。
圖3 螢光素酶測定miR-369的靶基因
總結
Tau蛋白的過度磷酸化是AD的重要發生機制之一，其限制了軸突的正常傳遞、促使神經原纖維纏結形成，並誘導了神經元細胞的死亡。Fyn是Src家族的非受體酪氨酸激酶，而SRPK2是一種細胞週期調節激酶，二者均已被證明與AD發病過程中tau蛋白的過度磷酸化有關。本研究證實了miR-369的缺失會引起 Fyn和SRPK2活性上調，從而促進tau磷酸化；而提高miR-369水平可能是AD治療研究的一種潛在選擇。
參考文獻：
YAO X, XIAN X, FANG M, et al. Loss of miR-369 Promotes Tau Phosphorylation by Targeting the Fyn and Serine/Threonine-Protein Kinase 2 Signaling Pathways in Alzheimer’s Disease Mice [J].
編譯作者：樂行僧 (Brainnews創作團隊)
校審：Victoria, Simon (Brainnews編輯部)
