3月27日雅培（Abbott）研發的ID NOW COVID-19 test獲得了美國FDA的緊急使用授權（emergency use authorization，EUA），這是目前最快速的COVID-19核酸檢測試劑，陽性結果最快可在5分鐘內獲得，陰性結果可在13分鐘內確認。
在美國總統川普的強勢安利下，這款神器瞬間刷屏，有人認為這是美國高科技的象徵；有人認為其靈敏度不如國產試劑盒，遠稱不上神器二字；有人認為它沒有很好的control所以假陰性比例高；有人認為利用這款儀器月測500萬是吹牛；有人分不清核酸檢測和抗體檢測，認為我國二月份就有5分鐘檢測試劑了。那麼ID NOW到底怎麼樣？時隔兩週關於它的介紹還是寥寥無幾。本文將從ID NOW的歷史、設備、試劑組成、操作流程、性能原理方面進行全面介紹。
ID NOW的前世今生
2000年Ionian公司成立，3年後該團隊在PNAS發表了名為"Isothermal reactions for the amplification of oligonucleotides."的文章，首次介紹了缺口內切酶擴增技術。隨後該技術被應用於甲型乙型流感（Influenza A&B），A族鏈球菌（Strep A），呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus）的檢測上。
2010年Alere收購Ionian公司，並於2014年在歐洲推出了Influenza A&B的商品化檢測試劑。
2017年雅培收購Alere，並將該檢測正式更名為ID NOW，作為雅培診斷部門快速診斷業務的一部分。
一切的起源，2003年PNAS
ID NOW COVID-19的基本介紹：
檢測樣本：鼻拭子（Nasal Swab）、咽拭子（Throat Swab）和鼻咽拭子（Nasopharyngeal Swab）劃重點！不是血！是測病毒RNA，不是測抗體！
檢測平臺：ID NOW平臺，這個儀器只有一臺烤麵包機大小，重約3公斤，適用於進行POCT（Point-of-Care Testing，床旁檢測或即時檢測）。
ID NOW檢測平臺
試劑盒內容：
擴增室：橙色部件，包含兩個裝有凍幹試劑的密封反應管，用於靶向擴增SARS-CoV-2核酸和一個內參對照（internal control）。是設有內參對照的，但是具體怎樣質控缺少細節
樣品容器：藍色部件，含2.5 mL洗脫/裂解緩衝液。ID NOW不需要專門的核酸提取步驟
轉運裝置：白色部件，用來從樣品容器轉移2 x 100μL樣本到擴增室。
無菌拭子、陽性對照拭子、陰性對照拭子
ID NOW 試劑盒成分
具體流程：
簡單說就是將拭子在樣品容器中（含有2.5 mL洗脫/裂解緩衝液）涮一涮，之後用轉運裝置吸取2 x 100μL加入到擴增室的PCR管中（僅含有凍乾的試劑）進行擴增反應。整個過程不需要用到試管架和移液槍、且不需要專門的核酸提取步驟，這與real-time PCR是不同的（後續LOD的理解涉及這部分內容）。
ID NOW 操作流程
檢測原理：
設計引物利用缺口內切酶擴增技術（nicking endonuclease amplification reaction ，NEAR)技術特異性擴增RdRp片段的一部分（具體是哪段缺乏細節），擴增倍數可達108-1010，利用熒光標記的分子信標特異性地識別每個擴增的RNA靶標，ID NOW平臺監測熒光信號的積聚，達到閾值即顯示為陽性，未達到則為陰性。
擴增子靶點在新冠狀病毒基因組上的相對位置，GenBank NC_004718
NEAR的原理
由於COVID-19技術原理的細節還沒有披露，這裡以同樣為RNA病毒的流感病毒檢測為例：
NEAR反應體系包括：2個引物、3個酶（逆轉錄酶、DNA聚合酶以及nicking核酸內切酶）、熒光標記分子信標。
具體是哪種酶呢？2009年的US2009/0017453A1專利中是這樣描述的，聚合酶從以下聚合酶中挑選一種或幾種：Bst（大片段）、9oN、VentR（exo-）DNA聚合酶、Therminator和TherminatorⅡ。nicking核酸內切酶從以下挑選一種或幾種：Nt.BspQⅠ、Nb.BbvCi、Nb.BbsmⅠ、Nb.BbsrDⅠ、Nb.BtsⅠ、Nt.AlwⅠ、Nt.BbvCⅠ、Nt.BstNBⅠ、Nt.CvipⅡ、Nb.Bpu10Ⅰ和Nt.Bpu10Ⅰ。
具體到流感病毒的檢測，沒有細節詳細說是哪種，但是根據酶切位點在NNNN之後，推測是Nt.BstNBⅠ，因為它的酶切位點也是4個N之後。
NEAR的原理簡單概括就是
首先利用逆轉錄酶以RNA單鏈為模板合成DNA單鏈，正向引物和反向引物分別與模板結合延伸並在nicking內切酶的作用下形成正向引物和反向引物框定的正向引物+X+Y+反向引物的NEAR擴增二聚體。之後以此為模板，每輪由nicking內切酶在單鏈上切開缺口，DNA聚合酶侵入延伸形成新的雙鏈，如此往復（B3a）。而切下的單鏈XY或X'Y'模板也可以與新的引物結合在DNA聚合酶作用下延伸，進入切口延伸的循環（B4a）。在不斷的延伸、切除、延伸循環中實現XY和X'Y'模板的指數級擴增。1、NEAR擴增二聚體的形成
NEAR擴增二聚體的形成
2、產物指數擴增：
在延伸、切除、延伸循環中，產物指數擴增
以上就是有關ID NOW COVID-19 test的介紹。第二部分將就圍繞ID NOW的一些爭議進行討論。
參考文獻：
1. Isothermal reactions for the amplification of oligonucleotides. PNAS, 2003
2. Evaluation of Alere i Influenza A&B for Rapid Detection of Influenza Viruses A and B. JCM，2014
3. Amplification litigation. Clinical Omics，2019
4. Nicking and extension amplification reaction for the exponential amplification of nucleic acids. US20090017453A1, 2009
5. www.abbott.com
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