PCR 實驗室是否產生假性結果,基本出發點在於“壓差控制”

PCR 實驗室是否產生假性結果,基本出發點在於“壓差控制”,為什麼這麼說,SICOLAB現簡述一下我們的想法觀點,歡迎共同交流討論!

眾所周知,PCR 實驗室的各個實驗區域之間應形成單向工藝流、物 流、人流與氣流,實現單向流程的屏障保護。通過嚴格的單向流線,避免實驗之間的相互干擾和交叉汙染,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成汙染,產生假性結果。

一、基本瞭解

1、四個過程

(在這裡面的醫學檢驗、病理、分子生物等專業的人都基本瞭解,SICOALB就不多重複了,簡單說一下)PCR 實驗室又叫基因擴增實驗室,是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱,用於放大特定的 DNA 片 段,可看作生物體外的特殊 DNA 複製。完成一組 PCR 實驗,通常需經過試劑準備、樣品製備、核酸擴增和產物分析 4 個過程。

2、單一流向

為避免交叉汙染,進入各個區域的工作流程須嚴格遵循單一方向進行,按照清潔-半汙染-汙染的順序排列,各區內的試劑和耗材不能再進入任何“上游”區域。也就是(試劑準備區-樣品製備區-核酸擴增區-產物分析區)。

其中,試劑準備區、樣品製備區為擴增前區,核酸擴增區、產物分析區為擴增後區。擴增前區與擴增後區應嚴格分開,必須使用不同的房間,兩區之間設置一定的隔離。如使用全自動分析儀,核酸擴增區、產物分析區可合併為擴增產物分析區。

三、PCR實驗室的佈局形式

一是分散形式,二是組合形式。

1、分散形式是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠,分散佈置。對於這種佈置方式的 PCR 實驗室,由於各個實驗之間不易相互干擾,因此無特殊要求。

2、組合形式是指完成 PCR 4 個實驗過程的實驗用房彼此相鄰、集中佈置,形成一塊完整、獨立的實驗區域。由於各個實驗用房集中佈置,容易造成相互干擾,因此,對總體佈局以及屏障系統具有嚴格的要求。

四、PCR實驗室的壓差控制是避免汙染核心

1、壓差的控制主要分為兩種:一是不帶緩衝間,二是帶緩衝間。

不帶緩衝間:由於場地限制及投資限制,一些新建 PCR 實驗室僅由專用走廊與 4 個實驗區組成,每個實驗區無專用的緩衝間。4 個實驗區共用 1 個專用走廊,工作流線由左向右。

實驗時,人流與物流分離,工作人員通過專用走廊進出各實驗區,試劑和樣品通過帶聯鎖裝置的傳遞窗進行傳遞,保證試劑和樣品在傳遞過程中不受汙染。


PCR 實驗室是否產生假性結果,基本出發點在於“壓差控制”

帶緩衝間:在場地和投資均允許的情況下,PCR 實驗室較為理想的佈置方式,是每個實驗區均帶一個專門的緩衝間。

帶緩衝間的PCR實驗室又可分為四個區皆帶緩衝間,也可分為只有一個“產物分析區”不帶緩衝間的。


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3、常見PCR實驗室壓差設計

PCR 實驗室的各個實驗區域之間應形成單向流程的屏障保護,環境壓力從試劑準備區到產物分析區,逐漸遞減。

1)試劑準備區是工藝流線的開始,設計為正壓或常壓,避免外界環境的汙染。

2)樣品製備區一般為常壓或負壓,大多數情況下設計成二級生物安全實驗室,避免實驗產物溢出,汙染外界環境。

2)核酸擴增區為負壓,避免實驗產物溢出,汙染外界環境。

4)產物分析區是最主要的擴增產物汙染來源,通常壓力設計為最低,避免實驗產物溢出,汙染外界環境。

以上為SICOLAB整理,實驗室整體設計建設工程、生物樣本建設工程、GMP環境建設工程、環保工程。


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