上周，美國雅培公司發佈的一款核酸檢測方法迅速佔領了國內各大媒體的頭條。對於陽性樣品5分鐘即可確認，而排除陰性需要13分鐘的檢測方法，令科技界和臨床界深感震撼。美國雅培最初發布ID Now是在2018年10月25日，
FDA批准其用於甲流和乙流（INFLUENZA A & B）以及鏈球菌A（Streptococcu A）的快速檢測；同時該平臺得到了美國臨床實驗室改進法案修正案 （Clinical Laboratory Improvement Amendments ）批准，表明了FDA對於該平臺權威性和先進性的認可。
該設備的使用方法，簡單到基本就是要把大象裝冰箱的操作方式。這些工業設計，充分考慮了病原檢測時效性和操作的便捷性，而且設備重量不到3公斤。
ID Now的核心技術叫等溫鏈式核酸擴增，這種技術最大的特點是通過低溫酶反應啟動下一輪擴增，
不需要傳統PCR中耐熱聚合酶的參與和升溫降溫循環。針對RNA的等溫擴增牽涉兩個重要的生化反應，一個是在逆轉錄酶催化下，由RNA逆轉錄合成配對的DNA片段，一個是在T7 DNA 合成酶的催化下，DNA複製形成配對鏈，而這個混合反應設計的關鍵，就是在產物DNA序列上加入T7啟動子序列。
有了這樣的設備，再設計針對新冠病毒核酸的引物和探針就能工作了。根據ID Now針對新冠病毒的操作說明，病毒核酸擴增反應5min時產生足夠強的信號，即判斷樣品為陽性，而持續至13min仍沒有信號，則判斷為陰性。
既然方法和原理是已知的，雅培的方案有何獨到之處呢？其關鍵在於一項專利技術，即在DNA-RNA雜交鏈上形成缺口的技術，在經典的方案中，引物本身是DNA-RNA雜合分子，退火後利用RNaseH處理形成新的缺口，供DNA合成酶再結合。這種方法被稱為鏈置換擴增（Strand Displacement Amplification），這一原理相關的檢測方法由於需要使用四條引物。所以檢測靈敏性相對較低。
在雅培申請的專利中，退火後雙鏈的缺口是特殊的限制性內切酶形成的。因為一般的內切酶是雙鏈切割，而專利技術中採用的酶是單鏈切割，這些酶包括Nb.BbvCI, Nb.BSmI,等，正是這些工程化的酶，
決定了同樣是等溫擴增，ID Now平臺可以只使用兩條引物，因此獲得更高的靈敏度。
作為即時檢驗設備，ID Now已經用於美國甲流和乙流臨床檢測，該方法主要針對甲流的PB2基因和乙流的PA基因進行檢測。臨床研究表明，以經典的PCR方法作為參照，相對於其他即時檢測方法，如採用RT－PCR的LIAT和Xpert，以及採用免疫層析方法的BD Veritor，ID Now在靈敏度和特異性的表現都不錯，而操作時間上的優勢是非常明顯的。
作為核酸檢測技術的一種，ID Now的準確率和靈敏性不是最高的，但即時臨檢（Point-of-Care Testing）在當前疫情爆發的狀態下，有著非比尋常的意義！
參考文獻：
1. METHOD AND KIT FOR DETECTING TARGET NUCLECACD；US 2014/0017692 A1
2. Nucleic Acid Isothermal Amplification Technologies - A Review
3. Comparison of the ID Now Influenza A & B 2,Cobas Influenza A/B, and Xpert Xpress Flu Point-of-Care Nucleic Acid Amplification Tests for Influenza A/B Virus Detection in Childre
4. www.abbott.com
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