多年來，流式實驗中同種型對照被廣泛用作陰陽性界定的標準，但實驗顯示其存在較大的變異性，受到越來越多的質疑。
實驗證實在MNCs中，非特異性結合主要是單核細胞，主要是IgG1和IgG2a同種型，而IgG2b同種型則沒有實質性結合。
而這些同種型對照的非特異性結合可以被市售的Fc-block，人或小鼠血清以及高濃度的純化人或小鼠IgG完全阻斷。
重要的是，沒有一種測試的封閉劑會對特異性mAb或活/死染料的染色質量產生負面影響。
對於免疫熒光染色，使用鼠源mAb染色人細胞時，人IgG封閉效果優於鼠IgG。
人和小鼠血清並不會由於免疫球蛋白濃度不足而封閉效果差，均可有效阻斷非特異性mAb結合。2.5％人A血清封閉的樣品中，最終IgG濃度約為≈250μg/ mL，這表明低至1％的人血清可能與100μg/ mL人IgG一樣有效。但血清可能會影響細胞的激活狀態，如影響表面抗原表達和細胞因子產生。此外，不同批次的血清可能含有濃度可變的生物活性化合物，如內毒素/脂多糖可以激活細胞並導致表面蛋白的裂解。因此，使用血清作為封閉劑可能會導致數據變化並限制實驗室內部和實驗室之間的可比性。
故而用純化的IgG比血清封閉更可取，原因有幾個：可以將其在4°C下長時間保存；它相對便宜；批次間的差異小；最重要的是，它不像血清成分複雜多變。此外，使用人IgG（而不是小鼠IgG）封閉兼容抗小鼠Ig二抗的間標。最後，市售的Fc阻滯劑也很有效，但有兩個明顯的缺點：成本相對較高，製造商未提供有關產品活性化合物的詳細信息。
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